[发明专利]高效温控正筛选克隆载体的设计及构建方法

摘要

本发明提供设计和构建用于克隆DNA片段的新型分子克隆载体的方法。本发明利用噬菌体ΦX174的溶菌基因E的表达产物能够导致宿主大肠杆菌细胞死亡的机制设计和构建所述克隆载体。当目的片段插入所述载体上的克隆位点时将导致E基因表达沉默，因此含重组载体的阳性转化子在诱导温度(42℃)下培养时正常生长成菌落克隆，而绝大部分(99.9％)阴性转化子在该温度下培养时将因E基因表达而死亡，不能长成菌落克隆。本发明可用于设计、构建普通克隆载体和T载体。本发明所述克隆载体具有抑制阴性克隆生成的技术特征，因此除用于单基因克隆外，特别适用于构建基因组文库和cDNA文库。

主权项

1.本发明设计的高效温控正筛选克隆载体是用于克隆DNA片段的质粒载体，其与已有其它克隆载体一样具有质粒复制起点、抗生素抗性基因，能够在大肠杆菌细胞内复制、扩增和保存。其特征在于：使用所述载体克隆外源DNA片段时，只需要在特定的诱导温度(42℃)下培养即可高效筛选出阳性转化子克隆。