[发明专利]一种重组可溶性人FGFR2胞外段及其生产方法与应用

摘要

本发明公开了一种重组可溶性人FGFR2胞外段及其生产方法与应用。本发明在通过大肠杆菌高效表达FGFR2的基础上，对影响其复性效率的各种因素进行了定性定量研究，确定了重组人可溶性人FGF受体胞外段体外变复性的较为合适的方法，使其复性效率达到10％～20％，且成本低、周期短、适合大规模生产。本发明利用游离的FGFRs的胞外段与血液及肿瘤组织中的FGFs结合，降低了游离FGFs的水平，从而竞争性抑制了FGFs的信号，有效抑制了肿瘤的增殖、转移以及血管形成，并以S252W+P253R双突变型FGFR2胞外段的效果最佳。

主权项

1.一种重组可溶性人FGFR2胞外段的生产方法，其特征在于包括如下步骤：(1)目的基因截短型FGFR2的构建；根据截短型FGFR2胞外段氨基酸序列，按照大肠杆菌密码子偏好性原则设计四对引物，四对引物序列分别如序列表NO：1～NO：4所示，由内而外分别进行四轮重叠延伸扩增，首先是F1、R1互为模版扩增，然后以第一轮产物作为模版，F1、R1作为引物进行下一轮的扩增，如此进行4轮扩增；(2)FGFR2双突变型的构建；针对S252W和P253R双突变的引物称为M252+253_F和M252+253_R，序列如序列表NO：5所示；(3)双酶切FGFR2基因与载体，连接构建重组载体，转化宿主菌，构建FGFR2基因工程菌；(4)培养FGFR2基因工程菌，分离、清洗、溶解包涵体得到包涵体溶解液；(5)纯化包涵体；(6)复性；(7)超滤、冻干得到可溶性人FGFR2胞外段。