[发明专利]超螺旋质粒分离纯化工艺无效
| 申请号： | 200710028389.0 | 申请日： | 2007-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN101070543A | 公开（公告）日： | 2007-11-14 |
| 发明（设计）人： | 黄树林;李黄金;薄华本;邵红伟;沈娟;余雪松 | 申请（专利权）人： | 广东药学院 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/63 |
| 代理公司： | 广州粤高专利代理有限公司 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510006广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种超螺旋质粒分离纯化工艺，不使用动物源性的酶，不使用对人畜有毒的苯酚、氯仿等有机溶剂，优化了工艺原料的用量和步骤，降低了生产成本，减少了对环境的污染，提高了提取效率，为超螺旋质粒DNA在制备基因治疗和基因疫苗药物方面的应用打下了坚实的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 超螺旋 质粒 分离 纯化 工艺 | ||
【主权项】：
1、一种超螺旋质粒分离纯化工艺，其特征是包括以下步骤：(1)取发酵菌液，4℃、5000g离心2min，去上清，得菌体沉淀；(2)STE洗脱液洗涤，于4℃、5000g条件下离心2min，去上清，沉淀干燥得湿菌；(3)湿菌中加入溶液I；(4)加入溶液溶液II，轻轻混匀，室温放置3min；(5)加入冰预冷溶液III，轻轻混匀，冰上放置5min，于4℃、12000g条件下离心15min，取上清液；(6)上清液中加入硫酸铵调电导率至280-285ms/cm，4℃放置20min，于4℃、12000g条件下离心15min，取上清液；(7)上清液经疏水层析柱层析，洗脱收集第2个峰；(8)第2个峰经分子筛柱层析，洗脱收集第1个峰。
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