[发明专利]生产和纯化甲型肝炎灭活疫苗的方法无效
| 申请号： | 200710022423.3 | 申请日： | 2007-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN101306199A | 公开（公告）日： | 2008-11-19 |
| 发明（设计）人： | 张玉慧;赵永强;曹雨露;许峰;金晓中 | 申请（专利权）人： | 江苏延申生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/29 | 分类号： | A61K39/29;A61K39/39;A61P1/16;A61P31/14;C12N7/00 |
| 代理公司： | 常州市科谊专利代理事务所 | 代理人： | 孙彬 |
| 地址： | 213018*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种生产和纯化甲型肝炎灭活疫苗的方法，其工艺步骤为：从工作细胞库中复苏Vero细胞，将Vero细胞接种于2～5层2～5升的盛放培养液的转瓶中，进行高密度培养，取工作种子毒种接种于Vero细胞，经吸附后培养至病毒增殖高峰期；将经过Vero细胞培养的含HAV病毒的细胞消化后收获，通过离心后弃上清，加磷酸盐缓冲液悬浮制成甲肝病毒原液；甲肝病毒原液经过破碎后，加入氯仿，掁摇离心取上层水相，然后再加入磷酸盐缓冲液，制成粗制甲肝病毒液，经超滤浓缩后，再经疏水柱、凝胶柱两步纯化，最后过滤除菌，收集过滤液为纯化甲肝病毒液，进行灭活，然后经过佐剂吸附后，制成甲肝半成品，分装得甲型肝炎灭活疫苗。本发明能提高细胞密度、提高病毒产量、降低生产成本，并可实现批量生产。 | ||
| 搜索关键词： | 生产 纯化 肝炎 疫苗 方法 | ||
【主权项】：
1、一种生产和纯化甲型肝炎灭活疫苗的方法，其特征在于其工艺步骤为：1)从工作细胞库中复苏Vero细胞，进行细胞的传代扩增，将Vero细胞接种于2～5层2～5升的盛放培养液的转瓶中，进行高密度培养，培养液为含2-10％新生小牛血清的199培养基或MEM培养基，调PH值至7.2～7.4；2)取工作种子毒种接种于Vero细胞，经吸附后于33℃～37℃培养至病毒增殖高峰期，其间换培养液3～5次；3)将经过Vero细胞培养的含HAV病毒的细胞消化后收获，通过离心后弃上清，加磷酸盐缓冲液悬浮制成甲肝病毒原液；4)甲肝病毒原液经过破碎后，加入氯仿，振摇离心取上层水相，然后再加入磷酸盐缓冲液，重复抽提3～5次，制成粗制甲肝病毒液；5)粗制甲肝病毒液经超滤浓缩后，再经疏水柱、凝胶柱两步纯化，最后过滤除菌，收集过滤液为纯化甲肝病毒液；6)将纯化甲肝病毒液进行灭活；7)灭活后的甲肝病毒液经过佐剂吸附后，制成甲肝半成品，分装得甲型肝炎灭活疫苗。
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