[发明专利]检测烟草病毒系列免疫胶体金试剂及其制备方法

摘要

本发明的检测烟草病毒系列免疫胶体金试剂及其制备方法包括检测TMV病毒的免疫胶体金试纸条及其制备方法、检测CMV病毒的免疫胶体金试纸条及其制备方法和检测PVY病毒的免疫胶体金试纸条及其制备方法。其制备方法具有生产流程简单、成本低；产品的灵敏度高、重复性好；检测费用只需要RT－PCR的1/5～1/10，比酶标试剂盒也要便宜得多；检测速度快，全过程只需30分钟，可以现场检测；结果准确、快速，操作简便，易于推广使用。

主权项

1、检测TMV病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：(1)多克隆抗体：取纯化的烟草花叶病毒注射兔子，采血，取血清，提纯抗体IgG，纯度＞95％；(2)胶体金：将100ml0.01％氯化金用2-3ml的1％柠檬酸三钠还原成15nm-40nm的颗粒溶液；(3)TMV免疫胶体金溶液：用0.1mol/L K2CO3将胶体金溶液的pH值调至7-8，将胶体金溶液按100ml胶体金溶液中加入0.5mg-2mg步骤(1)的TMV多克隆抗体，混合均匀，得TMV免疫胶体金溶液；(4)将上述的TMV免疫胶体金溶液点到玻璃纤维上，形成TMV胶体金；(5)将TMV多克隆抗体溶液和羊抗兔多克隆抗体，分别点在硝酸纤维膜的不同位置上；(6)将滤样纸、胶体金、硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到一张不干胶的胶板上，然后切割成试纸条；(7)真空干燥：真空泵内的温度控制在15-25℃；真空干燥的时间控制在2-5小时；真空泵内的大气压不高于0.1毫巴。