本发明公开了一种狼牙病毒核酸检测引物探针、试剂盒及应用,涉及分子生物学领域;该引物和探针组合包括检测狼牙病毒的引物对和探针;所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑2所示,所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。采用本发明的引物探针能对临床筛查过程中所发现的疑似患者进行狼牙病毒分子生物学鉴定或检测,本发明只需将包含引物探针的反应预混液加入反应管,再加入样品核酸模板,即可进行PCR反应,大大缩短操作时间,减少样品之间交叉污染,其具有准确性高、敏感性强、特异性好的特点,能够满足对未知样品中狼牙病毒的定性检测要求。