本发明提供了基于pt‑NGS的心脏感染病原体检测引物组,包括第1引物对至第103引物对,其中,第n引物对由SEQ ID No.(2n‑1)所示的第n正向扩增引物和SEQ ID No.2n所示的第n反向扩增引物组成,n=1~103;还公开了包含此引物组的试剂盒及方法。与现有技术相对比,本发明具有以下优点:本发明提供的基于pt‑NGS的心脏感染病原体检测引物组、试剂盒及方法,有效提高了心脏感染病原体检测过程中的PCR检测灵敏度及测序过程的特异性,首次提供了检测嗜心肌病毒的成品panel,大幅增加了可检测病原体的数量,降低了漏检率。同时,此种检测方法所需样本量小、检测时间短,适用于临床治疗的筛查需求。