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[发明专利]一种柑橘溃疡病菌侵染过程实时观察方法-CN201210052627.2无效
发明人： 邓子牛;刘利平;李大志;龙桂友;李建挥 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2012-03-02 - 公布日： 2012-07-11 - 主分类号： C12Q1/06 文献下载
摘要：一种柑橘溃疡病菌侵染过程实时观察方法，包括以下步骤：（1）利用三亲本杂交法将广泛寄主载体pMP2463上的增强型绿色荧光蛋白基因（egfp）导入野生型柑橘溃疡病菌，获得增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的溃疡病菌；（2）将获得的EGFP标记的柑橘溃疡病菌通过喷雾方式接种到柑橘叶片表面，通过注射方式接种到柑橘叶肉间隙；（3）撕取叶表皮或者利用冷冻切片方法制样，在激光共聚焦显微镜下观察柑橘溃疡病菌在叶表面及叶肉间隙的数量和分布情况。采用本发明，能够利用EGFP标记的柑橘溃疡病菌对该病原菌在侵染柑橘过程中的附着、繁殖和空间分布进行实时观察，从而获得柑橘溃疡病与柑橘互作的时空关系；且操作简便，快捷。
一种柑橘溃疡病菌侵染过程实时观察方法

[实用新型]农用施药机的可调式喷杆装置-CN201120330521.5有效
发明人：李明;刘仲华;黄建安;邓子牛;戴思慧 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2011-09-05 - 公布日： 2012-05-30 - 主分类号： B05B15/08 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种农用施药机的可调式喷杆装置，其特征在于，包括设置在农用施药机架上的药箱、药泵和带喷头的喷雾装置，药箱和药泵之间以及药泵与喷头之间均通过药管连通；喷雾装置包括喷雾主杆、左喷杆和右喷杆，左喷杆和右喷杆均设置在喷雾主杆上，所述的喷头设置在左喷杆和右喷杆的上端部。该农用施药机的可调式喷杆装置能灵活调节喷杆的高度和宽度。
农用施药调式装置

[发明专利]一种农用施肥施药一体机-CN201110260376.2有效
发明人：李明;刘仲华;黄建安;邓子牛;戴思慧;罗海峰;罗江河;李龙 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2011-09-05 - 公布日： 2012-04-25 - 主分类号： A01C15/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种农用施肥施药一体机，包括机架和安装在机架上的电机、行走机构、施肥执行系统、施药执行系统以及扶手；行走机构包括设置在机架前部的驱动轴及驱动轮和设置在机架后部的两个万向转向轮；驱动轮设置在驱动轴上，电机与驱动轴通过链轮传动连接；扶手设置在机架的后部，施肥执行系统设置在机架中部，施药执行系统设置在机架的前部，驱动轴与施肥执行系统传动连接。该农用施肥施药一体机能同时实现施肥和施药，功能丰富且操控方便。
一种农用施肥施药一体机

[实用新型]一种农用施肥施药一体机-CN201120330271.5有效
发明人：李明;刘仲华;黄建安;邓子牛;戴思慧 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2011-09-05 - 公布日： 2012-04-25 - 主分类号： A01C15/16 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种农用施肥施药一体机，包括机架和安装在机架上的电机、行走机构、施肥执行系统、施药执行系统以及扶手；行走机构包括设置在机架前部的驱动轴及驱动轮和设置在机架后部的两个万向转向轮；驱动轮设置在驱动轴上，电机与驱动轴通过链轮传动连接；扶手设置在机架的后部，施肥执行系统设置在机架中部，施药执行系统设置在机架的前部，驱动轴与施肥执行系统传动连接。该农用施肥施药一体机能同时实现施肥和施药，功能丰富且操控方便。
一种农用施肥施药一体机

[实用新型]一种农用施肥机的施肥器-CN201120328500.X有效
发明人：李明;刘仲华;黄建安;邓子牛;戴思慧 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2011-09-05 - 公布日： 2012-04-25 - 主分类号： A01C15/16 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种农用施肥机的施肥器，包括肥料箱和排肥器，肥料箱和排肥器均设置在农用施肥机的机架上，所述的机架上设有带控制按钮的扶手，排肥器设置在肥料箱的下方；排肥器包括施肥轴、漏肥器和挡肥器，漏肥器上方设有进肥口，漏肥器内设有拨肥轮和排肥舌，施肥轴横向穿过漏肥器和挡肥器。该农用施肥机的施肥器能能灵活调节施肥量，且施肥动作易于切换，操控方便。
一种农用施肥

[发明专利]一种柑橘的基因瞬时表达方法-CN201110211961.3无效
发明人：戴素明;李芳;李大志;邓子牛 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2011-07-27 - 公布日： 2012-02-01 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：一种柑橘的基因瞬时表达方法，包括以下步骤：（1）将公知的含有外源基因的植物表达载体导入农杆菌EHA105中，再将含有植物表达载体的农杆菌EHA105接种于YEB培养基中，振荡培育16小时，使农杆菌EHA105生长达到对数生长期；（2）离心收集菌体并悬浮于缓冲液中，调整农杆菌EHA105菌液浓度OD值为0.1～1.2，28℃静置2小时，取1mL一次性注射器，去掉针头吸取农杆菌菌液待用；（3）在柑橘植株上选取刚转绿的成熟叶片，用针头将叶片背面表皮刺破，将注射器管口顶住叶片刺破处并推动，将菌液从破损处渗入叶片并扩展到全叶片。本发明操作方便，无需组织培育过程而不受再生效率、转化效率低的限制，能快速使外源基因在柑橘体内表达。
一种柑橘基因瞬时表达方法

[发明专利]基于PCR的串联重复序列快速构建法和专用引物对及应用-CN201110001641.5无效
发明人：陈己任;熊兴耀;邓子牛 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2011-01-06 - 公布日： 2011-08-17 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：一种基于PCR的串联重复序列快速构建法和专用引物对及应用，该方法是以根据目的顺式作用元件设计的引物对对目的顺式作用元件进行PCR扩增，得到方向相同的目的顺式作用元件的低拷贝串联重复序列，该方法仅用一个PCR快速构建3个以上同向串联子，阳性克隆率达到18％，用两个PCR和一个亚克隆，可以获得200个同向串联子。低拷贝串联子在酵母杂交中用于重复顺式元件的构建快速有效，而获得的高拷贝串联在高分子重复蛋白质的生产具有极广泛的用途。
基于 pcr 串联重复序列快速构建专用引物应用

[发明专利]抗柑橘溃疡病pthA－nls基因及其构建方法与应用-CN200810030803.6无效
发明人： 邓子牛;胡春华;张家银;徐磊;杨莉;李娜 -专利权人： 邓子牛
申请日： 2008-03-13 - 公布日： 2008-09-10 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：抗柑橘溃疡病pthA－nls基因及其构建方法与应用。本发明利用柑橘溃疡病的致病基因pthA介导广谱抗性原理，构建了抗柑橘溃疡病的新基因pthA－nls。其构建方法包括以下步骤：(1)引物设计；(2)NLS序列的克隆；(3)PCR产物回收及酶切；(4)植物表达载体双酶切；(5)将pBI121酶切产物用T4 DNA连接酶与相应的NLS序列的PCR酶切产物连接；(6)将连接产物转化大肠杆菌DH5α，获得阳性克隆基因pthA－nls。基因pthA－nls可进一步对柑橘的感病品种进行遗传转化，获得抗柑橘溃疡病的新种质。本发明之抗柑橘溃疡病pthA－nls基因为柑橘抗溃疡病育种提供了有效工具。
柑橘溃疡 ptha nls 基因及其构建方法应用

[发明专利]一种柑橘成年态节间茎段遗传转化方法-CN200810030963.0无效
发明人： 邓子牛;谢玉明;熊兴耀;张家银;杨莉;胡新喜;袁飞荣;罗赛男;戴素明 -专利权人： 邓子牛
申请日： 2008-04-01 - 公布日： 2008-08-27 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：一种柑橘成年态节间茎段遗传转化方法，其包括如下步骤：(1)成年态材料消毒，在温室中选取半木质化的新梢，在采枝梢前一周，每隔一天用5wt％的次氯酸钠溶液擦拭枝梢一遍，共擦拭3～4次，然后再将次氯酸钠溶液擦拭过的枝梢剪下，在无菌条件下切割成4～5cm的茎段，用10wt％的次氯酸钠溶液加2～3滴吐温浸泡20～35min，无菌水冲洗3～4次，切割成1～1.5cm的节间茎段备用；(2)转化；(3)抗性芽再生；(5)温室二次嫁接；(6)抗性芽和抗性植株鉴定，采用公知的PCR分析法进行鉴定。本发明柑橘成年态材料消毒效果好，污染率低；不定芽诱导率达48％；抗性芽嫁接成活率达80％以上；再生转化植株没有嵌合现象。特别适合于冰糖橙、脐橙、椪柑等柑橘主栽品种的成年态节间茎段遗传转化。
一种柑橘成年节间遗传转化方法

[发明专利]一种柑橘节间茎段再生和遗传转化的方法-CN200510032445.9无效
发明人： 邓子牛;谢玉明;敖小平;郭琛;焦徕;胡春华 -专利权人： 邓子牛;谢玉明;胡春华
申请日： 2005-11-28 - 公布日： 2006-09-20 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种柑橘再生和遗传转化的方法，其包括如下步骤：(1)种子消毒和萌发，进行将种子在酒精、升汞溶液中浸泡消毒后，再用无菌水冲洗，然后播种于培养基上培养，获得无菌苗；(2)对照材料芽的诱导，以MS培养基作为基本培养基，外加生长调节剂进行培养；(3)外植体转化处理，用农杆菌(携带目的基因)浸染无菌苗节间茎段(上胚轴)；(4)抗性芽的诱导；(5)不定芽微芽嫁接成苗；(6)温室二次嫁接。本发明的优点是：种子消毒效果好，几乎无污染；再生效率高，不定芽诱导率高达95％；共培培养基和筛选培养基能适合多品种和多种类型基因的遗传转化。
一种柑橘节间再生遗传转化方法

[发明专利]一种快速繁殖枳橙的方法-CN200510031836.9无效
发明人： 邓子牛;胡春华 -专利权人： 邓子牛;胡春华
申请日： 2005-07-08 - 公布日： 2005-12-21 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速繁殖枳橙的方法，其包括如下步骤：(1)嫁接植株带节茎段外植体芽的诱导萌发诱导培养基配方为MS+BA 0.5～1.5mg·L^－1；(2)芽的增殖继代培养使用培养基MS+BA0.2～1mg·L^－1+NAA 0.01～0.1mg·L^－1；(3)生根培养与移栽以1/2MS+NAA 0.2～0.5mg·L^－1+0.2％活性炭诱导增殖芽生根，培养温度24±2℃，每天连续光照10－14小时，光照强度为1000～1500lx；培养20～35天后，取出试管苗移栽，移栽基质配方为白砂土∶草炭或发酵棉籽壳＝1∶0.8－1.2。应用本发明繁殖枳橙，获得的再生植株质量高，繁殖系数可达3以上，能达到工厂化繁殖柑橘砧木的技术要求。
一种快速繁殖方法

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