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[发明专利]一种与油菜含油量性状紧密连锁的分子标记及应用-CN201210280711.X有效
发明人： 王汉中;孙美玉;华玮;刘静;黄顺谋;王新发;刘贵华 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2012-08-08 - 公布日： 2012-11-07 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种与油菜含油量性状紧密连锁的分子标记及应用，一种与油菜含油量性状紧密连锁的分子标记BrSF34-123，筛选步骤为：1）甘蓝型油菜品种zy036和51070杂交获得DH代分离群体；2）设计引物对亲本进行多态性筛选，构建遗传连锁图谱；3）通过对DH分离群体进行田间实验和考种获得含油量的表型数据；4）结合开发的高密度分子标记遗传连锁图谱，以及分离群体的基因型和含油量表型数据进行QTL检测，获得一种与油菜含油量性状紧密连锁的分子标记。因此利用该标记进行辅助选择，可以快速筛选高含油量株系用于油菜含油量育种，育种选择目标明确，节约成本。
一种油菜含油量性状紧密连锁分子标记应用

[发明专利]油菜抗裂角性状主效基因位点分子标记及应用-CN201210243367.7有效
发明人： 王汉中;华玮;胡志勇;刘贵华;王新发;师家勤;黄顺谋;杨庆 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2012-07-16 - 公布日： 2012-10-24 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种油菜抗裂角性状主效基因位点分子标记及应用，步骤包括：1）利用在抗裂角性状上有显著差异的甘蓝型油菜品种中双11和73290杂交，后代自交获得抗裂角性状分离的F2和F2:3分离群体；2）利用SSR引物对亲本DNA进行多态性的筛选，通过对F2代分离群体进行SSR分子标记基因型分析构建遗传连锁图谱；3）通过对F2和F2:3分离群体进行田间实验和考种获得抗裂角性状的表型数据；4）结合开发的高密度分子标记遗传连锁图谱，以及分离群体的基因型和表型数据，利用QTLCart2.5软件进行QTL检测，检测到甘蓝型有爱A9连锁群上控制油菜抗裂角的主效基因位点Psr.A9，与该主效基因位点紧密连锁的分子标记BrSF0007-39，利用该标记进行辅助选择可大大提高抗裂角育种的选择效率。
油菜抗裂角性状基因分子标记应用

[发明专利]一种多色标记活体病毒颗粒的方法-CN201110358688.7有效
发明人：何治柯;王汉中;周鹏 -专利权人：武汉大学
申请日： 2011-11-14 - 公布日： 2012-06-13 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明公开了一种多色标记活体病毒颗粒的方法，其步骤：A、借助病毒展示系统，将绿色荧光蛋白与病毒囊膜蛋白GP64融合表达，构建出GP64上带有绿色荧光蛋白的重组病毒；B、金属配合物[Ru(phen)2(dppz)]2+溶液加入胎牛血清的Grace’s培养基中培养sf宿主细胞；将构建的重组病毒Bac-EGFP加入培养的宿主细胞中进行病毒感染，置于培养箱中培养，收获子代病毒；C、收集，纯化双色标记的子代病毒颗粒，得到的子代病毒通过透射电镜，电感耦合等离子体质谱和激光扫描共聚焦显微镜表征其结构，测量其单颗病毒金属配合物含量及展示其单颗病毒的双荧光信号。操作简便，标记效率高，得到的标记病毒具有优异的荧光信号，能更好地满足实时示踪活病毒颗粒侵染宿主细胞研究的需要。
一种多色标记活体病毒颗粒方法

[发明专利]一种检测病毒的方法及检测试剂盒-CN201110287941.4无效
发明人：庞代文;赵蔚;张万坡;张志凌;王汉中 -专利权人：武汉大学
申请日： 2011-09-26 - 公布日： 2012-05-02 - 主分类号： G01N33/577 文献下载
摘要：本发明涉及一种病毒的检测方法，包括步骤：通过将目标病毒外膜的糖蛋白的抗体与磁性纳米/微球偶联得到免疫磁性纳米/微球，用该免疫磁性纳米/微球捕获样品中的目标病毒得到磁球病毒复合物，将生物素化的所述病毒的外膜的糖蛋白的抗体与磁球病毒复合物孵育，再与链霉亲和素偶联的量子点孵育得到磁球-病毒-量子点复合物，通过检测磁球-病毒-量子点复合物的荧光信号检测病毒。运用该方法，本发明实现了H9N2亚型禽流感活病毒的特异性识别，富集分离和高灵敏度的检测。本发明还提供了用于该方法的检测试剂盒。本方明具有操作简单，特异性强，灵敏度高等特点，整个检测过程可在一个小时内完成。
一种检测病毒方法试剂盒

[发明专利]油菜光合作用相关基因BnGLK1及其应用-CN201010221504.8有效
发明人： 王汉中;华玮;刘静;刘贵华;王新发;杨庆 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2010-07-02 - 公布日： 2012-01-11 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了油菜光合作用相关基因BnGLK1及其应用。本发明中所使用的BnGLK1基因是下列核苷酸序列之一：1)序列表中BnGLK1的DNA序列如SEQ ID NO.1所示或与序列表中SEQ ID NO.1限定的DNA序列具有70％以上同源性DNA序列。2)BnGLK1蛋白序列是具有序列表中SEQ ID NO.2氨基酸残基序列或是将SEQ ID NO.2中的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代缺失或添加且具有与SEQ ID NO.2的序列相同活性的衍生蛋白质。利用拟南芥作为受体的转基因结果证实，BnGLK1基因的过量表达提高了植物的光合效率，进而提高了拟南芥种子中的含油量。因此光合作用相关基因BnGLK1在油菜及其他油料作物的含油量育种中具有很好的应用前景。
油菜光合作用相关基因 bnglk1 及其应用

[发明专利]复制缺陷型抗EV71和CA16病毒双价疫苗的制备方法-CN201110008471.3无效
发明人： 王汉中;柯贤良;张万坡;李红霞;郑振华;张振峰 -专利权人：中国科学院武汉病毒研究所
申请日： 2011-01-17 - 公布日： 2011-12-21 - 主分类号： A61K39/295 文献下载
摘要：本发明是复制缺陷型抗EV71和CA16病毒双价疫苗的制备方法，该方法包括构建EV71P1多聚蛋白稳定表达细胞系、构建以CA16VP1基因替代EV71P1基因的EV71病毒全长cDNA克隆、转染P1稳定表达细胞系获取复制缺陷型病毒的步骤。本发明的优点是：（1）操作简便，所需时间短，以少量复制缺陷型病毒感染稳定表达P1细胞系到产生下一代复制缺陷型病毒只需24h；（2）复制缺陷性疫苗不能复制，安全性高；（3）产量大，产生的复制缺陷病毒滴度高达106到108；（4）直接从细胞上清收取复制缺陷病毒作为疫苗，杂质少，便于纯化。
复制缺陷 ev71 ca16 病毒疫苗制备方法

[发明专利]一种油菜千粒重性状主效基因位点及应用-CN201110236050.6无效
发明人： 王汉中;师家勤;刘贵华;王新发;华玮;黄顺谋 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2011-08-17 - 公布日： 2011-12-21 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了一种油菜种子重量性状主效基因位点及应用，步骤包括：1）利用油菜测序品种杂交，杂种F1自交构建分离群体；2）利用公共和已开发的SSR和SNP引物对亲本DNA进行多态性筛选，通过对F2代分离群体进行分子标记基因型分析构建遗传连锁图谱；3）通过对F2和F2:3分离群体进行田间实验和考种获得种子重量的表型数据；4）结合分离群体的基因型和表型数据，进行QTL检测。获得了A9连锁群上控制油菜千粒重的主效基因位点qTSW.A9和分子标记BrSF7-181a。通过该标记对两亲本衍生的F3代进行基因型分析，保留携带有利标记的单株，考种结果表明千粒重高于F2:3家系均值的F3单株比例高达89.5%，因此利用该标记进行辅助选择可大大提高高产育种的选择效率。
一种油菜千粒重性状基因应用

[发明专利]蔗糖转运载体蛋白基因在油菜中的用途-CN201010196078.7有效
发明人： 王汉中;华玮;刘静;刘贵华;王新发;杨庆 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2010-06-04 - 公布日： 2011-12-07 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了一种蔗糖转运载体蛋白基因在提高油菜产量中的应用。本发明中所使用的蔗糖转运载体蛋白基因是下列核苷酸序列之一：1)序列表中SEQ IDNO.1的DNA序列或与序列表中SEQ ID NO.1限定的DNA序列具有70％以上同源性且编码相同功能蛋白质的DNA序列。蔗糖转运载体蛋白序列是具有序列表中SEQ ID NO.2氨基酸残基序列的蛋白质或者是将SEQ ID NO.2中的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代缺失或添加且具有与SEQ ID NO.2的氨基酸残基序列相同活性的衍生蛋白质。本发明将利用上述基因序列在油菜中的应用来提高油菜籽的产量进而提高油菜的产油量。
蔗糖转运载体蛋白基因油菜中的用途

[发明专利]油菜生长调节因子基因GRF2及应用-CN201010196095.0有效
发明人： 王汉中;华玮;刘静;刘贵华;王新发;杨庆 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2010-06-04 - 公布日： 2011-12-07 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了一种油菜生长调节因子基因GRF2及应用，其碱基序列为SEQID??NO：1所示的核苷酸序列，同时包括其它作物中与SEQ??ID??NO：1所示的DNA序列至少有70％同源性的基因序列；还包括在添加、取代、插入或缺失一个或多个核苷酸而产生的突变体等位基因或衍生物。研究结果证实，该类基因在油菜高油亲本及高油F2混合群体中表达量高于低油亲本及低油F2混合群体。利用拟南芥作为受体的转基因结果证实，此类基因的过量表达不但提高了转基因拟南芥的含油量，同时也增加了种子的千粒重。一种油菜生长调节基因BnGRF2在提高拟南芥等植物种子千粒重、含油量中的应用。因此，此类基因在油菜及其他油料作物的产油量育种中具有很好的应用前景。
油菜生长调节因子基因 grf2 应用

[发明专利]一种油菜每角粒数性状主效基因位点及应用-CN201110154442.8无效
发明人： 王汉中;师家勤;刘贵华;王新发;华玮;黄顺谋 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2011-06-09 - 公布日： 2011-10-26 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了油菜每角粒数性状主效基因位点及应用，步骤包括：1）利用在每角粒数性状上有极显著差异的甘蓝型油菜品种杂交；2）利用公共和已开发的SSR和SNP引物对亲本DNA进行多态性筛选，通过对F2代分离群体进行分子标记基因型分析构建遗传连锁图谱；3）通过对F2和F2:3分离群体进行田间实验和考种获得每角粒数性状的表型数据；4）结合分离群体的基因型和表型数据，进行QTL检测。获得了A6连锁群上控制油菜每角粒数的主效基因位点qSN.A6和分子标记BrSF50-18。通过该标记对两亲本衍生的F3代进行基因型分析，保留携带有利标记的单株，考种结果表明每角粒数高于F2:3家系均值的F3单株比例高达83.4%，因此利用该标记进行辅助选择可大大提高高产育种的选择效率。
一种油菜角粒数性状基因应用

[发明专利]油菜抗裂角性状结构和主效基因位点Psr9及其应用-CN201110127277.7无效
发明人： 王汉中;华玮;胡志勇;刘贵华;王新发;黄顺谋;詹高淼 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2011-05-17 - 公布日： 2011-10-05 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了油菜抗裂角性状结构和主效基因位点Psr9及其应用，其步骤：a)利用油菜高低抗裂角组合zy72360和R1进行杂交，F1代自交产生F2代分离群体；b)提取亲本zy72360和R1、F1代及F2代分离群体的叶片总DNA；c)搜集油菜SSR标记公开数据库并自主开发SSR标记、利用亲本筛选多态性引物；d)通过在F2代分离群体中的分布构建遗传图谱，借助抗裂角指数数据进行QTL位点分析，并得到与抗裂角性状主效基因紧密连锁的SSR标记；e）通过解剖显微镜观察亲本以及F2代群体成熟角果的结构，测量果瓣与胎座框结合面积指数。本发明提高了选择效率，抗裂角主效基因位点位置明确，检测方便快速，快速筛选出高抗裂角株系用于油菜抗裂角育种，育种选择目标明确，节约了成本。
油菜抗裂角性状结构基因 psr9 及其应用

[发明专利]一种EV71病毒的化学发光免疫成像检测方法-CN201010542645.X无效
发明人： 王汉中;何治柯;张万坡;陈璐;李海刚 -专利权人：中国科学院武汉病毒研究所
申请日： 2010-11-12 - 公布日： 2011-09-07 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明是基于磁性微球分离和化学发光免疫成像的EV71病毒检测方法，该方法主要是：将EV71病毒兔抗多克隆抗体与磁性微球偶联；在微孔板中加入待检样品和磁性微球，使待检样品中的病毒与病毒多克隆抗体结合；再加入生物素化的EV71病毒VP1蛋白兔抗多克隆抗体，使其与待检样品特异性反应；加入SA-HRP，使其与生物素结合，最终形成磁性微球－多克隆抗体－病毒－多克隆抗体－HRP复合物；加入化学发光底物，检测化学发光强度。本发明中化学发光强度和待测病毒浓度成正比，可以得出化学发光强度和待测EV71病毒浓度之间的线性关系。本发明具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点，能更好地满足EV71病毒临床检测的需要。
一种 ev71 病毒化学发光免疫成像检测方法

[实用新型]离合式备胎升降器-CN201020551011.6无效
发明人：王向杰;王汉中;王惠钦 -专利权人：王向杰
申请日： 2010-10-08 - 公布日： 2011-05-11 - 主分类号： B62D43/02 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种离合式备胎升降器，具有机架1、绞盘、绞盘驱动机构、升降索和承胎架，其中：所述绞盘驱动机构包括绞盘侧壁构成的棘轮3，压杆套装在绞盘的转轴上，压杆上铰接有与棘轮相配合的棘爪，机架上设有防止棘轮倒转的防转棘爪；所述承胎架上设有动滑轮，升降索绕过动滑轮两端分别固定在机架和绞盘上；绞盘端面配合连接有控制绞盘转动的离合器。与现有技术相比，结构紧凑、具有自锁功能，安全可靠，操作方便，收放可控，可广泛应用于各种商用车中。
离合备胎升降

[发明专利]油菜含油量性状主效基因位点及应用-CN200910063481.X有效
发明人： 王汉中;华玮;刘静;刘贵华;王新发;杨庆;孙美玉;黄顺谋 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2009-08-07 - 公布日： 2011-03-23 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种油菜含油量性状主效基因位点及应用，步骤包括：1)利用高低含油量组合zy036(51％)和Y817(35％)杂交获得含油量性状分离的F2代群体；2)利用亲本筛选多态性引物，通过在F2代分离群体中的分布构建遗传图谱，根据F2群体的含油量数据获得含油量性状紧密连锁的分子标记并得到主效基因位点。本发明公开了同一连锁群上两个控制油菜zy036高含油量性状主效基因位点BnOCN22-1和BnOCN22-2，同时公开了与主效基因位点紧密连锁的2个分子标记。通过紧密连锁的分子标记检测zy036及其衍生品种(系)中是否含有该主效QTL位点，可预测其含油量高低，大大提高了含油量育种的选择效率。
油菜含油量性状基因应用

[发明专利]一种以电压门控质子通道Hv1作为乳腺癌治疗的靶向位点的基因药物-CN201010297433.X无效
发明人：李树杰;王一凡;王汉中;赵青;潘君成 -专利权人：南开大学
申请日： 2010-09-30 - 公布日： 2011-02-23 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一种以电压门控质子通道Hv1作为乳腺癌治疗的靶向位点的基因药物。本发明是以编码电压门控质子通道Hv1的基因作为靶向位点，运用慢病毒感染的方法来治疗乳腺癌。电压门控质子通道Hv1的基因序列如序列表序列1所示。本发明提供的一对以电压门控质子通首Hv1作为乳腺癌治疗的靶向位点药物的cDNA干扰片段Hv1-SiRNA-PLVTHM，其序列如序列2和序列3。根据实验结果表明，电压门控质子通道Hv1的cDNA干扰片段可以抑制高转移乳腺癌细胞的迁移和侵润能力，从而抑制肿瘤的转移。因此利用本发明提供的抗电压门控质子通道Hv1表达的相应cDNA干扰片段制成的药物，可以用于乳腺癌的治疗，在乳腺癌的治疗中发挥很大的作用，前景十分广阔。
一种电压门控质子通道 hv1 作为乳腺癌治疗靶向基因药物