本发明提供了一种可区分布鲁氏菌A19疫苗株与国内流行野毒株的分子标记,以及检测该标记的的荧光定量PCR引物、探针及检测方法。所提供的分子标记,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明还提供一种用于区分布鲁氏菌A19疫苗与国内流行野毒株的引物对,用于扩增在中国流行的布鲁氏菌野毒株的特异性核酸片段。本发明提供一种可区分布鲁氏菌A19疫苗和国内流行野毒株的引物、探针及检测方法,对我国布病防控具有重要的现实意义。
本发明提供一种布鲁氏菌病诊断用多肽,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1;本发明所提供的多肽用于制备用于检测布鲁氏菌病的制品。本发明所提供的多肽与人及牛、羊的布鲁氏菌感染血清发生反应,不与感染了其他细菌的血清发生交叉反应,从而保证了检测的特异性。重复试验显示,无论检测人还是动物,该抗原的批内和批间变异系数均小于10%,表明所建立的ELISA试剂盒重复性良好。与传统的布鲁氏菌病血清学诊断方法相比,使用本发明所述的多肽建立的布鲁菌病抗体ELISA试剂盒也具有相似的准确度。
本发明提供了一种可区分牛种和羊种布鲁氏菌的分子标记和检测方法,其中可识别所有种布鲁氏菌的特异性核苷酸片段的序列为SEQ ID NO:1;用于检测牛种布鲁氏菌的特异性分子标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:5;用于检测羊种布鲁氏菌的特异性分子标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:9。本发明还通过用于检测上述特异性核算片段的引物对和探针。本发明制备的BSCP引物和探针具有通用性,可检测所有种的布鲁氏菌,引物探针不但可以独立使用,也可以制备成三重实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌种的鉴定。检测的样品可以是分离的菌株,也可以是临床收集的流产物、奶、拭子、组织等样品,而且具有高敏感性、高特异性等特点。
本发明而提供一种布鲁菌病特异性融合蛋白抗原,其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。本发明所提供的融合蛋白抗原包含了多个布鲁氏菌优势外膜抗原表位,具有好的伸展性、稳定性和生物活性。利用本发明融合蛋白建立的犬布鲁氏菌病ELISA抗体检测试剂盒具有高的敏感性和特异性。特异性交叉实验显示,融合蛋白与大肠杆菌O157血清、大肠杆菌H7血清、沙门氏菌O抗原多价血清、小肠耶尔森氏菌血清和单增李斯特菌血清与阴性血清的OD450比值均小于1.5,犬布鲁菌阳性血清与阴性血清的OD450比值大于5,表明本发明所提供的融合蛋白不与感染了其他细菌的血清发生交叉反应,从而保证了检测的准确性。