本发明提供了一种猫传染性腹膜炎病毒冻干型核酸检测试剂盒、制备方法及检测方法,涉及生物技术领域。本发明提供的用于检测猫传染性腹膜炎病毒的特异性引物和探针;所述引物对具有如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示的核酸序列;所述探针具有如SEQ ID NO.3所示的核酸序列。该引物组能够特异性识别猫传染性腹膜炎病毒的N基因,能够用于猫传染性腹膜炎病毒的检测。本发明提供的检测猫传染性腹膜炎病毒的试剂盒灵敏度高、特异性强、重复性好,能在常温下储存,能够用于猫传染性腹膜炎病毒的检测,最低检测下限为43copies/mL,可为猫传染性腹膜炎的临床检测和流行病学调查提供技术支持。