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[发明专利]一种去除蛋白质中内毒素的方法-CN201510412140.4在审
发明人：张英;吕茂杰;杨保收;付旭彬;梁武 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2015-07-14 - 公布日： 2015-10-28 - 主分类号： C07K1/36 文献下载
摘要：本发明提供了一种去除蛋白质中内毒素的方法，该方法先后结合层析、超滤和普通过滤，符合蛋白纯化的工艺流程，在有效去除内毒素的同时实现蛋白的纯化，且不影响蛋白自身性质，尤其适用于各类基因工程菌表达的胞内、胞外蛋白的处理。此外，本发明通过对过滤模式、过滤压力、膜孔径等条件的优化设计，简化了操作步骤和操作时间，从而降低了生产成本、提升处理量，利用本发明方法可将内毒素含量降低至畜禽临床应用标准范围之内，并且在去除内毒素的同时不影响制品本身的性质，适合规模化生产应用。
一种去除蛋白质内毒素方法

[发明专利]一种二联灭活疫苗制备方法-CN201410659965.1在审
发明人： 吕茂杰;梁武;杨保收;李亚杰;边程 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2014-11-18 - 公布日： 2015-04-01 - 主分类号： A61K39/12 文献下载
摘要：本发明提供了一种二联灭活疫苗制备方法，本发明制备的二联灭活疫苗用于预防猪O型口蹄疫、猪圆环病毒2型，本发明制备方法简单，疫苗的抗原含量高，免疫方便，与现有技术中的分次免疫相比，减少了免疫次数，减少了应激反应，降低了免疫成本。其次，通过二联疫苗与单价疫苗免疫仔猪的效力比较发现，两种抗原成分在同一针二联疫苗中不仅相互没有干扰，而且二联疫苗单次注射仔猪的免疫效果高于两种单苗先后注射的免疫效果。
一种二联疫苗制备方法

[发明专利]一种猪圆环病毒2型灭活冻干疫苗的制备方法-CN201410659949.2有效
发明人：唐荣宏;吕茂杰;李亚杰;杨保收;梁武 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2014-11-18 - 公布日： 2015-03-04 - 主分类号： A61K39/12 文献下载
摘要：本发明提供了一种猪圆环病毒2型灭活冻干疫苗的制备方法，该方法对病毒培养液先后进行澄清处理、超滤浓缩、分子筛层析柱纯化，有效保证了用于制备疫苗的抗原中杂质含量减少到最低，从而降低了产品使用后产生副反应的现象，同时有助于保证疫苗免疫效果。此外，由于本发明对灭活后的抗原直接冻干制剂、不添加油佐剂，因此不存在难以注射、吸收的问题。利用本发明制备的PCV2灭活冻干疫苗抗原含量高，免疫原性高；抗原纯度高，安全性好，副反应低；无佐剂，快速产生抗体保护；易注射，易吸收。
种猪圆环病毒型灭活冻干疫苗制备方法

[发明专利]一种His标签包涵体蛋白纯化方法-CN201410448675.2在审
发明人：孙艳;吕茂杰;杨保收;盛长忠;梁武 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2014-09-04 - 公布日： 2014-12-17 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明提供了一种His标签包涵体蛋白的纯化方法。本发明以N-十二烷基肌氨酸钠为变性剂，以碱性PH的CAPS(N-环己基-3-氨基丙磺酸)为缓冲液，裂解包涵体蛋白。N-十二烷基肌氨酸钠为一种表面活性剂，通过破坏蛋白内的疏水键溶解包涵体蛋白，变性条件较为温和。该变性方法的最大特点是，避免了尿素易分解产生异氰酸盐导致蛋白多肽链的自由氨基甲酰化的缺陷，溶解蛋白经Ni-NTA柱纯化效果优于尿素，蛋白溶解后即具有生物活性，无需做复性处理。
一种 his 标签包涵蛋白纯化方法

[发明专利]一种猪流行性乙型脑炎灭活疫苗制备方法-CN201410448674.8在审
发明人： 吕茂杰;刘涛;杨保收;盛长忠;梁武 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2014-09-04 - 公布日： 2014-12-17 - 主分类号： A61K39/12 文献下载
摘要：本发明提供了一种猪流行性乙型脑炎灭活疫苗制备方法。本发明经过噬斑克隆纯化筛选出的中国仓鼠肺细胞适应毒能够稳定产生细胞病变，毒价稳定在10^7.0～10^8.0TCID50/mL，免疫原性稳定。利用仓鼠肺细胞系繁殖猪流行性乙型脑炎病毒，病毒适应性好、制苗毒液效价高。本发明采用先分离后浓缩的浓缩病毒工艺技术，利用中空纤维膜澄清纯化系统，实现了病毒液和细胞碎片的分离，解决了病毒颗粒浓缩时易堵膜和对剪切力敏感易聚集的难题，还有效降低了灭活疫苗成品副反应性，提高了灭活疫苗安全性。本发明灭活剂选用二乙烯亚胺取代甲醛，其对病毒抗原的破坏作用小，保证了抗原中有效免疫原的完整性。
种猪流行性脑炎疫苗制备方法

[发明专利]一种猪细小病毒灭活疫苗免疫效力评价方法-CN201410449450.9在审
发明人： 吕茂杰;杨保收;盛长忠;梁武 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2014-09-04 - 公布日： 2014-12-17 - 主分类号： G01N33/96 文献下载
摘要：本发明提供了一种猪细小病毒灭活疫苗免疫效力评价方法，该方法是通过考察注射疫苗后机体血清抗体水平来评价的，具体技术方法是创新性的建立了针对PPV的ELISA抗体效价评价方法。具有操作简便、特异和敏感等特点，为PPV灭活苗抗体检测提供一种有效技术手段。
种猪细小病毒疫苗免疫效力评价方法

[发明专利]一种猪伪狂犬病毒纯化方法-CN201410145991.2有效
发明人：吴全忠;米娜;李倬;丁旭娜;吕茂杰;杨保收;梁武;李守军 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2014-04-11 - 公布日： 2014-07-23 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种猪伪狂犬病毒纯化方法，该方法综合采用了微滤澄清纯化法，超滤浓缩纯化法，重复洗滤法等一系列工艺，最大限度的增大了PRV的回收效率，降低了纯化成本。以本发明制备的猪伪狂犬病毒浓缩液成品尤其适宜于制备疫苗，以本发明制备的猪伪狂犬病毒浓缩液成品制备的疫苗相对于现有技术的猪伪狂犬病毒疫苗而言，具有安全性高，均一性好、免疫效果好等优点，同时，本发明工艺简便、成本较低，具有突出的规模化应用前景。
种猪狂犬病毒纯化方法

[发明专利]一种猪瘟兔化弱毒活疫苗效力检测方法-CN201310663187.9有效
发明人：李倬;梁武;李守军;郁宏伟;刘涛;柳珊;杨保收;朱秀同;李建丽;吕茂杰;郑朝朝 -专利权人：瑞普（保定）生物药业有限公司
申请日： 2013-12-10 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：一种猪瘟兔化弱毒活疫苗效力检测方法，它包括6个步骤：细胞的铺板及培养、病毒的梯度稀释、病毒沉降剂的添加、病毒的接种及培养、免疫荧光检测和统计特异荧光孔的数目，并计算猪瘟病毒滴度。本发明为一种可精确评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力，且易于推广应用的IFA检测方法，能够对生产、运输各环节中的疫苗及半成品进行快速、精确检测，从而保证了疫苗的质量。与传统的兔体定型热反应法相比，具有省时，省力，直观，准确等优点。
一种猪瘟兔化弱毒活疫苗效力检测方法

[发明专利]一种293细胞的大规模悬浮培养方法-CN201310439028.0有效
发明人：夏广欣;吕茂杰;何召庆;王寿山;吴全忠;杨保收;梁武;李守军 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2013-09-23 - 公布日： 2013-12-25 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明提供一种293细胞的大规模悬浮培养方法，该方法先在T形组织培养瓶中对293细胞种子进行传代扩增，再转移到搅拌式细胞培养瓶中进一步传代扩增，而后转移到5L容积生物反应器中进行培养，而后将培养得到的细胞转移接种至250L容积生物反应器中进行培养，过程中定期补加新鲜培养基用于维持培养环境适宜细胞生长。本发明提供的技术方案填补了293细胞悬浮培养技术的技术空白，所选培养条件适于293细胞生长，实现了细胞培养密度的最大化，减少了细胞培养的体积，减少了后续的劳动强度，质量均一稳定，生产过程衔接紧密，易操控。本发明在细胞培养和病毒增殖过程中进行补液，保证了细胞增殖所需的营养物质，又提高了营养液的利用率，节约成本。
一种 293 细胞大规模悬浮培养方法

[发明专利]一种利用激流式生物反应器制备猪流行性腹泻病毒的方法-CN201310438027.4无效
发明人：夏广欣;吴全忠;吕茂杰;何召庆;杨保收;梁武;李守军 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2013-09-23 - 公布日： 2013-12-25 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用激流式生物反应器培养猪流行性腹泻病毒的方法，该方法充分发挥了激流式生物反应器的工艺优点，优选了适宜猪流行性腹泻病毒在宿主细胞内增殖的环境条件，填补了利用激流式生物反应器培养猪流行性腹泻病毒的技术空白。与现有技术相比，本发明的细胞培养过程逐日增大空气流量，加快系统内气体循环，有利于培养液内CO2的溢出，有利于细胞生长，进而利于病毒的增殖；同时本发明病毒的接种过程无需吸附，简化操作，节省人力；此外本发明使用的浓缩营养液，可以倍增多种氨基酸含量，为病毒繁殖提供了充足的营养，有利于提高病毒产量。
一种利用激流生物反应器制备流行性腹泻病毒方法

[发明专利]一种制备猪瘟活疫苗的方法-CN201210578125.3无效
发明人：李倬;刘涛;郑朝朝;郁宏伟;李建丽;杨保收;梁武;吕茂杰;邱贞娜;柳珊 -专利权人：瑞普（保定）生物药业有限公司
申请日： 2012-12-27 - 公布日： 2013-06-19 - 主分类号： A61K39/187 文献下载
摘要：一种制备猪瘟活疫苗的方法，属于生物技术领域。所述方法包括以下步骤：a.细胞接种；b.制苗用细胞培养；c.病毒接种；d.病毒培养与收获；e.疫苗制备。本发明对制苗用细胞进行了筛选，加强了细胞与病毒的适应性；采用激流灌注式生物反应器培养体系提高了病毒的增殖滴度及收获量；而且整个生产工艺不涉及其他生物安全和公共卫生问题，适合于大规模生产。
一种制备猪瘟疫苗方法

[发明专利]一种鸡传染性鼻炎、鸡毒支原体二联类脂灭活疫苗的制备方法-CN201010289583.6无效
发明人：杨灵芝;李香云;董新荣;吕茂杰;贾红梅;陈申秒 -专利权人：山东滨州博莱威生物技术有限公司
申请日： 2010-09-25 - 公布日： 2012-04-11 - 主分类号： A61K39/116 文献下载
摘要：本发明提供了一种鸡传染性鼻炎、鸡毒支原体二联类脂灭活疫苗的制备方法发明，属于兽用生物技术领域。本发明是这样实现的，制备好A型和C型副鸡嗜血杆菌灭活抗原菌液、鸡毒支原体抗原液，A型和C型副鸡嗜血杆菌灭活抗原菌液按体积比为1∶1的比例混匀，得到副鸡嗜血杆菌灭活混合抗原菌液，将副鸡嗜血杆菌灭活混合抗原菌液与鸡毒支原体抗原液按体积比为1∶1～1∶1.5的比例混匀后倒入乳化罐内搅拌，同时缓缓加入杨树皮类脂，使杨树皮类脂在混合物中的最终体积百分比浓度为2.0～3.8％，继续搅拌乳化30～60分钟。疫苗容易吸收、无毒副作用、免疫产生时间短、免疫持续期长，免疫效果好，能有效预防鸡传染性鼻炎和鸡毒支原体病。
一种传染性鼻炎支原体二联类脂灭活疫苗制备方法

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