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[发明专利]一种评价溶瘤细菌对小鼠毒性的方法及其应用-CN202210374343.9在审
发明人： 华子春;盖文化;李东仪;吕昭睿;朱宇阳;董万法;王筱楠;徐依聪 -专利权人：江苏靶标生物医药研究所有限公司;中国药科大学
申请日： 2022-04-11 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： A61K49/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种评价溶瘤细菌对小鼠毒性的方法及其应用。本发明的一种评价溶瘤细菌对小鼠毒性的方法，包括如下步骤：(1)取5‑6周龄C57BL/6小鼠，适应性饲养5天后，按照设置溶瘤细菌的剂量给菌，给药途径可以是静脉给药、腹腔给药、口服给药、皮下给药等常规给药途径；(2)连续观察14天，每天固定时间观察小鼠死亡情况及一般体征；(3)通过概率单位图解法计算不同菌株LD50。本发明实验设备简单，操作方便，评价指标客观、易重现，可较准确地评估溶瘤细菌对小鼠毒性，并计算得出LD50，重复性好，适用范围广。能够满足溶瘤菌株研发过程中对小鼠急毒实验的毒性评估需求。
一种评价细菌小鼠毒性方法及其应用

[发明专利]一种抗丢失时空可控表达的新型质粒及其应用-CN202210206992.8在审
发明人： 华子春;李霖;李晨阳;吴乐阳 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司;南京诺佰康生物科技有限公司
申请日： 2022-03-03 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗丢失时空可控表达的新型质粒及其应用，并应用于构建细菌载体新冠疫苗。本发明的一种抗丢失时空可控表达的新型质粒，所述的细菌分泌信号为革兰氏阴性菌III型分泌信号，所述的革兰氏阴性菌III型分泌信号为沙门氏菌毒力岛2SPI‑2效应蛋白SseJ。具体地，通过将防丢失元件表达序列及启动子元件整合至质粒，保证细菌在宿主体内复杂环境条件下传代过程中稳定拷贝质粒，从而实现持久的异源蛋白表达，并应用至构建新型细菌载体新冠疫苗。
一种丢失时空可控表达新型质粒及其应用

[发明专利]一种膜联蛋白V的应用-CN201811587408.8有效
发明人： 华子春;林艳 -专利权人：江苏靶标生物医药研究所有限公司;常州南京大学高新技术研究院
申请日： 2018-12-25 - 公布日： 2022-06-14 - 主分类号： A61K38/17 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了一种膜联蛋白V在制备延缓糖尿病进程药物中的应用，具体包括：制备改善糖尿病生理指标和代谢状况，改善糖尿病模型胰岛素信号通路，改善糖尿病肝脏、胰腺和肾脏的病理变化，改善糖尿病血清肌酐和尿素氮水平，预防糖尿病肾脏并发症或肾功能损害的药物中的应用，以及在保护胰岛素瘤细胞免于糖尿病诱导剂链脲佐菌素导致的细胞凋亡中的应用。
一种蛋白应用

[发明专利]一种密度调控响应的减毒沙门氏菌表达系统及其制备方法和应用-CN202210181928.9在审
发明人： 华子春;吴乐阳;殷兴鹏 -专利权人：江苏靶标生物医药研究所有限公司
申请日： 2022-02-25 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种密度调控响应的减毒沙门氏菌表达系统及其制备方法和应用。对减毒沙门氏菌进行基因组遗传改造，替换或插入密度响应的关键调控元件LuxI或LuxR，并转入带有正反馈密度调控元件与防丢失系统的质粒，最终获得密度调控响应灵敏度更高的密度调控的减毒沙门氏菌表达系统。本发明所述的密度调控的减毒沙门氏菌表达系统可在特定菌株滴度下启动并实现可控的效应蛋白表达。本发明所使用的依赖群体密度响应的诱导型启动子的启动功效在细菌生长后期显著优于传统的强组成型启动子。本发明所述工程化菌株既可用于体外量产化生产常规的效应蛋白，也可用于借助细菌于肿瘤内特异性表达效应蛋白，实现体内更高效、安全与精准的治疗。
一种密度调控响应沙门氏菌表达系统及其制备方法应用

[发明专利]一种人源膜联蛋白人源膜联蛋白A5突变体二聚体的晶体结构的制备方法和应用-CN202210176728.4在审
发明人： 华子春;唐薇 -专利权人：南京大学;南京吉芮康生物科技研究院有限公司
申请日： 2022-02-24 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明公开了一种人源膜联蛋白A5突变体二聚体的晶体结构的制备方法，包括如下步骤：（1）将人源膜联蛋白A5的基因序列通过EcoRⅠ和XholⅠ酶切位点连接至pET‑28a(+)质粒上，将表达载体转入宿主大肠杆菌BL21(DE3)中表达，通过亲和层析纯化，获得高纯度蛋白；（2）将蛋白浓缩为10 mg/mL的蛋白水溶液，将蛋白溶液与池液混合，采取坐滴法对结晶条件进行高通量筛选；对结晶条件进行正交优化，制得人源膜联蛋白A5突变体二聚体的晶体结构。本发明所提供的突变体蛋白的结构信息可以用于更高效地开展制备检测试剂、诊断试剂盒制备、药物靶点筛选和治疗效果更好的变体蛋白研发，满足生物制药应用的要求。
一种人源膜联蛋白 a5 突变体二聚体晶体结构制备方法应用

[发明专利]一种减毒沙门氏菌分泌表达NTD结构域蛋白的新型冠状病毒疫苗抗原递呈系统及其应用-CN202011155284.3在审
发明人： 华子春;吴乐阳;李霖 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司;常州南京大学高新技术研究院
申请日： 2020-10-26 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种减毒沙门氏菌分泌表达NTD结构域蛋白的新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)疫苗抗原递呈系统及其应用，用于预防新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)。本发明通过构建可控的、稳定的、分泌表达NTD结构域蛋白的表达质粒和对减毒沙门氏菌的工程化改造，可以通过口服途径、在给药后可借助其特有的分泌系统，向抗原呈递细胞高效递送抗原性蛋白。递送的抗原性蛋白可被抗原呈递细胞有效地处理并呈递，最终实现激活/调节免疫系统，产生抗体，发挥疫苗的作用。
一种沙门氏菌分泌表达 ntd 结构蛋白新型冠状病毒疫苗抗原系统及其应用

[发明专利]一种减毒沙门氏菌分泌表达S2结构域蛋白的新型冠状病毒疫苗递呈系统及其应用-CN202011155286.2在审
发明人： 华子春;吴乐阳;李霖 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司;常州南京大学高新技术研究院
申请日： 2020-10-26 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C07K14/165 文献下载
摘要：本发明公开了一种减毒沙门氏菌分泌表达S2结构域蛋白的新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)疫苗递呈系统及其应用，用于预防新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)。本发明通过构建可控的、稳定的、分泌表达S2结构域蛋白的表达质粒和对减毒沙门氏菌的工程化改造，可以通过口服途径、在给药后可借助其特有的分泌系统，向抗原呈递细胞高效递送抗原性蛋白。递送的抗原性蛋白可被抗原呈递细胞有效地处理并呈递，最终实现激活/调节免疫系统，产生抗体，发挥疫苗的作用。
一种沙门氏菌分泌表达 s2 结构蛋白新型冠状病毒疫苗系统及其应用

[发明专利]一种减毒沙门氏菌分泌表达RBD结构域蛋白的新型冠状病毒疫苗抗原递呈系统及其应用-CN202011168321.4在审
发明人： 华子春;吴乐阳;李霖 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司;江苏靶标生物医药研究所有限公司
申请日： 2020-10-27 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种减毒沙门氏菌分泌表达RBD结构域蛋白的新型冠状病毒疫苗抗原递呈系统及其应用，用于预防新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)。本发明通过构建可控的、稳定的、分泌表达RBD结构域蛋白的表达质粒和对减毒沙门氏菌的工程化改造，可以通过口服途径、在给药后可借助其特有的分泌系统，向抗原呈递细胞高效递送抗原性蛋白。递送的抗原性蛋白可被抗原呈递细胞有效地处理并呈递，最终实现激活/调节免疫系统，产生抗体，发挥疫苗的作用。
一种沙门氏菌分泌表达 rbd 结构蛋白新型冠状病毒疫苗抗原系统及其应用

[发明专利]一种人源膜联蛋白人源膜联蛋白A5突变体二聚体的晶体结构及其解析方法-CN202210178427.5在审
发明人： 华子春;唐薇 -专利权人：江苏靶标生物医药研究所有限公司
申请日： 2022-02-24 - 公布日： 2022-05-06 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明公开了一种人源膜联蛋白A5突变体二聚体的晶体结构及其解析方法，所述的人源膜联蛋白A5突变体二聚体的晶体结构的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述的人源膜联蛋白突变体二聚体的晶体结构的一个晶格由4个蛋白分子组成，分别为：chain A、chain B、chain C、chain D；所述的蛋白晶体每个单分子含有4个repeat，所述的每个repeat由5个α螺旋和连接它们的loop组成。本发明所提供的突变体蛋白的结构信息可以用于更高效地开展制备检测试剂、诊断试剂盒制备、药物靶点筛选和治疗效果更好的变体蛋白研发，满足生物制药应用的要求。
一种人源膜联蛋白 a5 突变体二聚体晶体结构及其解析方法

[发明专利]一种使用硫化氢缓释供体ADT-OH抑制黑色素瘤转移的方法及其应用-CN202111511499.9在审
发明人： 华子春;庄红芹;蔡芳芳 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司;南京大学
申请日： 2021-12-06 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： A61K31/385 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了一种使用硫化氢缓释供体ADT‑OH抑制黑色素瘤转移的方法及其应用。本发明的一种使用硫化氢缓释供体ADT‑OH抑制黑色素瘤转移和生长的方法，改变肿瘤部位硫化氢含量，进而影响黑色素瘤细胞迁移和生长，从而达到抑制黑色素瘤转移和生长的效果。硫化氢缓释供体ADT‑OH可以在体内缓慢释放硫化氢，且对正常细胞的杀伤力较小，以较低浓度即可对黑色素瘤细胞产生迁移抑制作用。本发明的ADT‑OH通过抑制黑色素瘤细胞EMT过程抑制黑色素瘤细胞迁移，进而抑制肿瘤细胞转移，且对正常细胞杀伤力小，药物用量小，毒副作用少，其效果显著好于硫化氢标准供体硫氢化钠；本发明系首次应用硫化氢缓释供体ADT‑OH治疗黑色素瘤迁移和生长，目前尚未见相关报道。
一种使用硫化氢供体 adt oh 抑制黑色素瘤转移方法及其应用

[发明专利]一种铂类化合物和硫酸软骨素的组合物及其应用-CN201811637539.2有效
发明人： 华子春;穆飞飞 -专利权人：江苏靶标生物医药研究所有限公司;常州南京大学高新技术研究院
申请日： 2018-12-29 - 公布日： 2021-10-08 - 主分类号： A61K31/737 文献下载
摘要：本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及一种铂类化合物和硫酸软骨素的组合物及其应用。本发明公开的铂类化合物和硫酸软骨素进行组合联用给药，可应用于制备抗肿瘤药物中，药理学实验表明，其对不同的癌细胞具有明显的抗肿瘤效果，具体包括：本发明的铂类化合物与硫酸软骨素联合的组合物具有明显的抗肿瘤效果，组合物联用可有效缓解铂类药物单独给药时所带来的毒副作用；联用组合物对于新型高效、低毒副作用、抗耐药性的抗肿瘤药物具有潜在的开发价值。
一种化合物硫酸软骨素组合及其应用

[发明专利]一种重组人内皮抑素融合蛋白及其制备方法和应用-CN201710339825.X有效
发明人：徐根兴;华子春;谷鹏;荣志刚;朱浩文;黄佩华 -专利权人：江苏吴中医药集团有限公司苏州中凯生物制药厂;常州南京大学高新技术研究院
申请日： 2017-05-15 - 公布日： 2021-05-07 - 主分类号： C07K16/46 文献下载
摘要：本发明公开了一种Her2纳米抗体二聚体与一种重组人内皮抑素构成融合蛋白及其制备方法和应用，重组人内皮抑素融合蛋白包括Her2纳米抗体二聚体和重组人内皮抑素蛋白，该融合蛋白易于纯化，能特异性靶向Her2高表达的乳腺癌细胞，并具有较好的穿膜效果，能有效抑制肿瘤细胞生长；本发明公开了重组人内皮抑素融合蛋白可应用于制备临床上靶向检测或治疗乳腺癌的药物，可提高药物在肿瘤病变部位的浓度，相应提高了量效比；本发明还公开了重组人内皮抑素融合蛋白的编码基因的重组表达载体、转基因细胞系或转基因重组菌，以及基因工程制备方法，以应用于融合蛋白的临床生产制备。
一种重组内皮融合蛋白及其制备方法应用

[发明专利]一种铂类化合物和肝素类化合物的组合物及其应用-CN201811641364.2有效
发明人： 华子春;穆飞飞 -专利权人：江苏靶标生物医药研究所有限公司
申请日： 2018-12-29 - 公布日： 2021-03-30 - 主分类号： A61K31/727 文献下载
摘要：本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体公开了一种铂类化合物和肝素类化合物的组合物及其应用。本发明公开的铂类化合物和肝素类化合物的组合物，可应用于在制备抗肿瘤药物中，其对癌细胞有明显的抗肿瘤效果，具体包括：将抗血栓药物‑‑‑‑肝素类化合物，与铂类抗肿瘤化合物联用，使得肿瘤细胞对铂类化合物的敏感性增强；铂类化合物的抗肿瘤效果显著提升；组合物具有明显的抗肿瘤作用，并且可有效缓解铂类化合物单独给药时所带来的副作用。
一种化合物肝素组合及其应用

[发明专利]一种重组犬长效干扰素α的制备方法-CN202011188016.1在审
发明人： 华子春;石梦丹;徐根兴 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司
申请日： 2020-10-29 - 公布日： 2021-01-22 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组犬长效干扰素α的制备方法，所述融合蛋白通过将犬干扰素α和标签蛋白类弹性蛋白多肽ELP(ELP)进行融合表达的方式，在保留干扰素活性的情况下，延长其半衰期，增加其稳定性。所述重组犬长效干扰素α较普通犬干扰素的半衰期提高4倍以上，并且重组蛋白为可溶性表达，可以利用可逆相变循环(ITC)进行蛋白质分离纯化，过程简单而廉价。
一种重组长效干扰素制备方法

[发明专利]一种检测干扰素生物学活性的方法-CN202011061329.0在审
发明人： 华子春;石梦丹;徐根兴 -专利权人：南京吉芮康生物科技研究院有限公司
申请日： 2020-09-30 - 公布日： 2021-01-01 - 主分类号： C12Q1/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种干扰素生物学活性的检测方法，将含有干扰素刺激反应元件和荧光素酶基因的质粒转染到犬肾细胞(MDCK)，作为生物学活性测定细胞。当犬干扰素α(CaIFNα)与细胞膜上的受体结合后，通过信号转导，激活干扰素刺激反应元件，启动荧光素酶的表达，表达量与干扰素的生物学活性成正相关，通过测定其发光强度，以此来计算CaIFNα的生物学活性。与传统细胞病变抑制法相比，本发明检测准确度好，操作快速简单，且不需使用病毒株建立细胞模型；本发明不局限于犬干扰素α的活性测定，亦适用于其他干扰素的测定，如人干扰素、猪干扰素等。
一种检测干扰素生物学活性方法