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[发明专利]一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法-CN201811148051.3有效
发明人：卢刚;麻育源 -专利权人：浙江省人民医院
申请日： 2018-09-29 - 公布日： 2021-09-21 - 主分类号： C12N5/0793 文献下载
摘要：本发明涉及一种人颅骨间充质干细胞来源的神经元样细胞的悬浮培养方法，包括如下步骤：人体颅骨碎块或碎屑作为组织来源提取骨髓间充质干细胞，培养孵化后以104～106个/cm2的密度接种至诱导液；选用成品结冷胶加热至90℃以上配制成1％～3％质量分数比的溶液备用；采用电子显微镜或激光共聚焦显微镜观察不同浓度结冷胶溶液配制的悬浮凝胶中网络结构的致密度和孔径的大小；将选取的神经干细胞移入悬浮凝胶‑DMEM培养基中完成培养增殖。本发明的有益效果是：本发明的方法弥补了现有实验室条件的技术缺陷和因重力等客观因素的制约并结合神经干细胞的生物学行为和功能形态特征，利用经修饰处理的结冷胶配制悬浮凝胶‑DMEM培养基能有效地诱导分化人颅骨间充质干细胞。
一种颅骨间充质干细胞来源神经元细胞悬浮培养方法

[发明专利]一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法-CN201811148063.6在审
发明人：卢刚;麻育源 -专利权人：浙江省人民医院
申请日： 2018-09-29 - 公布日： 2019-01-11 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及一种从颅骨中分离间充质干细胞的方法，使用电动钻锯将5cm³～15cm³颅骨骨片切碎至每片15～25立方毫米；加入20～30ml生理盐水，于低温摇床中慢摇，温度为4℃～10℃，转速为100～200转/分钟，摇10～15分钟；然后200～400目筛网过滤，收集滤液离心收集细胞；而后用细胞培养液悬浮细胞，所述的细胞培养液组成为含体积浓度1％～3％的血清替代物的MEM‑alpha基础培养液；接种至细胞培养瓶中，置于37℃，含5％CO₂培养箱中培养；48小时后换液，除去未贴壁细胞。本发明的有益效果是：本发明所述方法从颅骨中快速高效分离得到具备典型特征的颅骨间充质干细胞，补充了间充质干细胞新的来源，有利于促进干细胞技术的研究和发展。
颅骨间充质干细胞充质干细胞细胞培养液离心收集细胞干细胞技术基础培养液未贴壁细胞细胞培养瓶血清替代物研究和发展典型特征电动钻锯高效分离立方毫米颅骨骨片生理盐水悬浮细胞目筛网换液切碎摇床接种过滤补充

[发明专利]一种人颅骨间充质干细胞诱导分化神经细胞的方法-CN201811148056.6在审
发明人： 麻育源;卢刚 -专利权人：浙江省人民医院
申请日： 2018-09-29 - 公布日： 2019-01-04 - 主分类号： C12N5/0793 文献下载
摘要：本发明涉及一种人颅骨间充质干细胞诱导分化神经细胞的方法，包括如下步骤：取人颅骨间充质干细胞，以10⁴～10⁶个/cm²的密度接种至诱导液中，在37℃，5％CO₂培养箱中诱导培养21天，获得成熟的神经细胞；诱导液组成：1×N2、1×B27、30～50ng/ml b‑FGF、10～30μg/ml VB12，溶剂为DMEM/F12基础培养液。本发明的有益效果是：本发明所述方法能够有效诱导人颅骨间充质干细胞分化为神经细胞，分化所得细胞不仅表达神经细胞标志蛋白，更为重要的是分化成熟细胞具备一定神经细胞超微结构。
神经细胞间充质干细胞人颅骨诱导分化诱导液分化标志蛋白超微结构成熟细胞诱导培养溶剂接种诱导细胞成熟