本发明提供了一种吡哆醛激酶突变体及其在磷酸吡哆醇合成中的应用,属于酶工程领域。所述突变体由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一次或多次突变得来,其中,含有第51位(N51K)、第175位(V175E)为突变体1,含有第51位(N51K)、第152位(D152E)为突变体2,含有第51位(N51K)为突变体3。本发明还提供了包含任一吡哆醛激酶突变体基因的重组质粒、重组菌株以及酶的表达方法和其在磷酸吡哆醇制备中的应用。较野生型吡哆醛激酶,本发明所述吡哆醛激酶突变体具有较高的催化效率,其中,突变体3酶活较野生型提高了23.3倍,将其用于合成磷酸吡哆醇,可在2‑5 h内实现99.8%以上的转化率。较之前化学合成法,不但工艺简单、转化率高,而且生产成本也相对较低,具有良好的工业应用前景。