本发明公开了一种可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列及其用于固定蛋白质的方法,属于生物工程技术领域。本发明所述的可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的序列为如核苷酸序列SEQ ID NO:1所示的大肠杆菌酰基载体蛋白基因序列或如核苷酸序列SEQ ID NO:2所示的可被4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰的短肽基因中的一种。通过包含上述序列的表达载体构建的大肠杆菌的重组表达系统,获得包含目标蛋白的融合蛋白,经酶AcpS或Sfp催化进行4’-磷酸泛酰巯基乙胺修饰,然后进行固定化,实现固定目标蛋白。该固定化方法反应条件温和,操作非常简便,固定化效率高,固定的目标蛋白稳定并保持非常高的活性,具有极大的市场价值与应用前景。