本发明提供了一种基于病原相关分子模式蛋白鉴定具有分泌功能信号肽的方法,包括以下步骤:(1)将待鉴定信号肽与大豆疫霉XEG1的C端融合,构建表达载体,所述大豆疫霉XEG1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;(2)将步骤(1)构建的表达载体转化感受态细胞;(3)将步骤(2)的感受态细胞注射入植物细胞中,观察注射位点植物细胞坏死情况,若注射位点植物细胞坏死,则待检测信号肽具有分泌功能,若注射位点植物细胞无坏死,则待检测信号肽不具有分泌功能。
本发明涉及一种快速诊断桃细菌性穿孔病的试剂盒,属于植物保护技术领域。本发明的试剂盒含有RPA引物对、特异性crRNA和单链DNA探针,所述RPA引物对序列如SEQ ID NO.1‑2所示,所述特异性crRNA序列如SEQ ID NO.3所示,所述单链DNA探针序列如SEQ ID NO.4和/或SEQ ID NO.5所示。本发明的试剂盒基于RPA技术和Crispr/Cas系统进行桃细菌性穿孔病主要病原菌Xap检测,通过横向流动检测试纸条和微型紫外手电筒实现可视化检测,简单灵活,成本低廉,灵敏度高,特异性强,用户可以自由选择,有效避免了某些场景无法使用的问题,在桃树疾病诊断和监控领域应用前景良好。
本发明提供用于检测桃黑星菌的LAMP引物及检测试剂盒。所述LAMP引物的序列如Seq ID No.1‑4所示。本发明将环介导恒温扩增技术用于桃黑星菌的快速检测,可从发病植物组织等复杂的病原菌环境准确地检测出桃黑星菌。该方法的特异性和灵敏度均较常规PCR方法更高,可对桃黑星菌的各种形态的繁殖体如菌丝、孢子等进行检测,对桃黑星病疫情的早期预警、疫区的病原监测等方面具有重要意义;同时可以免除高昂的仪器投入,便于基层推广使用。
本发明提供了一种利用抗病基因识别无毒效应蛋白以鉴定具有分泌功能信号肽的方法,包括以下步骤:(1)将待鉴定信号肽连接致病疫霉无毒效应蛋白Avr3a的C端构建表达载体,所述致病疫霉无毒效应蛋白Avr3a的C端氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;(2)将步骤(1)构建的表达载体转化感受态细胞;(3)将步骤(2)的感受态细胞和含有抗病基因的感受态细胞共同注射入植物细胞中,观察注射位点坏死情况,若注射位点坏死,则待检测信号肽不具有分泌功能,若注射位点无坏死,则待检测信号肽具有分泌功能。