热稳定性提升的酸性葡聚糖酶突变体及其应用,对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的葡聚糖酶BisGlu16B_∆C分别进行T40K、Q53L和S311Y突变,氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示,获得所述热稳定性改良的葡聚糖酶突变体T40K、Q53L和S311Y。经过改造优化,获得的突变体在60℃下的热稳定性得到了明显提升,进一步满足了饲料用酶的要求,因此,本发明中热稳定性提升的葡聚糖酶突变体T40K、Q53L和S311Y在饲料工业中展现出巨大的应用潜力。
一种葡聚糖酶突变体及其应用,是以如SEQ ID NO:1所示的葡聚糖酶BisGlu16B_∆C为母本对氨基酸残基Ala299突变后得到的一种突变体A299W。热稳定性方面,突变体A299W在60℃下的半衰期较野生型延长7.7倍,长达130分钟;pH耐受性方面,突变体A299W在pH7‑pH12之间剩余酶活较野生型提高2.2‑58倍;在催化活力方面,以大麦葡聚糖为底物时,突变体的催化效率较野生型提高94%。这样一种耐热、耐酸碱且高催化的β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体,在啤酒酿造、饲料添加以及生物能源等领域具有广阔的应用前景。
一种热稳定性提高的葡聚糖酶突变体及其应用,所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示的野生型葡聚糖酶的第43位的Ala突变为Pro,氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;第59位的Thr突变为Ile,氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示;或第165位的Gly突变为Lys,氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。以地衣多糖为底物时,突变体较野生型的最适pH值无明显变化,比活无明显变化,突变体A43P和T59I的最适温度较野生型提高5℃,本发明中三个突变体A43P、T59I和G165K在60℃下的半衰期分别比野生型(16分钟)延长34分钟、49分钟和24分钟。