本发明公开了茯苓酸合成的关键基因及应用，该茯苓酸合成的关键基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；关键基因包括PcCPR和CYP5035，PcCPR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，CYP5035的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；PcCPR和CYP5035均在pESC‑Trp载体质粒上；PcCPR和CYP5035均位于半乳糖启动子之后；PcCPR位于GAL10启动子之后，CYP5035位于GAL1启动子之后，GAL10启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，GAL1启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。本发明通过大量前期筛选和实验，找到了以羊毛甾醇为底物，进行C‑16羟基化和C‑20甲基羧基化的茯苓酸合成关键酶基因CYP5035；本发明有望构建完整的茯苓酸生物合成通路，阐释茯苓活性物质合成的内在品质属性，也可为茯苓酸生物合成细胞工厂研究应用提供数据支持，促进中药资源的创新发展。
