本发明涉及一种c‑di‑AMP合成酶单克隆抗体的重链和轻链可变区基因和编码的多肽及其应用。其重链可变区基因具有SEQ ID NO.1的序列,轻链可变区基因具有SEQ ID NO.3的序列。其重链可变区基因编码多肽具有SEQ ID NO.2的序列,其轻链可变区基因编码多肽具有SEQ ID NO.4的序列。具有上述可变区基因编码多肽的单克隆抗体DisA‑1B8与Rv3586的亲和力高,能够特异性识别不同分枝杆菌中的c‑di‑AMP合成酶,而不识别其他菌属细菌的该酶,具有较好的特异性。本发明所述的基因及其编码的多肽作为制备结核分枝杆菌及其他分枝杆菌感染的试剂、疫苗和药物的应用。
本发明涉及一种敲除c‑di‑AMP分解酶的重组耻垢分枝杆菌株。将耻垢分枝杆菌c‑di‑AMP降解酶基因MSMEG_2630的上下游同源臂分别连入pMSG360载体,重组质粒转化含有重组酶gp60和gp61pJV53质粒的耻垢分枝杆菌感受态细胞,筛选并获得一株敲除c‑di‑AMP分解酶的重组耻垢分枝杆菌株(rMS‑ΔCnpB),其保藏编号为:CCTCC M 2016336。rMS‑ΔCnpB菌株免疫小鼠,可调节小鼠体液和细胞免疫应答,尤其是感染结核分枝杆菌后的Th1型细胞免疫应答,并提高机体抗分枝杆菌感染的保护力,因而可用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂的研制,具有比较好的应用前景。
本发明涉及一种过表达结核分枝杆菌Rv3586的重组卡介苗菌株及其应用。将含结核分枝杆菌Rv3586编码基因的质粒转化入卡介苗,筛选获得菌株称为Bacillus calmette‑Guerin rBCG‑DisA,简称为rBCG‑DisA,保藏编号为:CCTCC M 2016335。过表达Rv3586的重组卡介苗rBCG‑DisA兼具靶抗原和卡介苗的双重优势,单独免疫或联合结核分枝杆菌Ag85B‑ESAT6亚单位疫苗加强免疫,可诱导正常和感染小鼠更强的免疫应答,提高机体抗分枝杆菌的保护力,因而具有良好的应用前景。