本发明提出一种用于抗犬细小病毒的单链抗体、制备方法及其应用，属于基因工程领域，能够解决常规抗体对犬细小病治疗效果不理想的技术问题。其中，用于抗犬细小病毒的单链抗体为耦联信号肽的单链抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，具体通过以下步骤制备得到：(1)基因合成与表达载体构建；(2)质粒转化与双酶切鉴定；(3)目的蛋白诱导表达；(4)目的蛋白纯化；(5)目的蛋白抗原结合活性、细胞增殖、细胞毒性以及对犬细小病毒抑制效果检测。本发明能够应用于抗犬细小病以及制备抗细小病毒药物制品方面。
本发明公开了一种以痘苗病毒天坛株为载体的新冠疫苗及其构建方法，属于生物工程领域。本发明用于新冠疫苗的重组病毒的构建方法包括如下步骤：(1)使用引物对P233、P234扩增RBD 5‘端片段，使用引物对p235、p236扩增RBD 3’片段，再通过重叠PCR扩增全长RBD片段，各引物序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示；(2)以pCDNA3.1‑LARA为骨架载体，通过酶切、连接、转化将RBD片段连入骨架载体上，构建重组穿梭质粒pCDNA3.1‑LARA‑S2RBD；(3)通过脂质体介导法将重组穿梭质粒转化到痘苗病毒天坛株中进行同源重组，得到重组病毒，该重组病毒能诱导产生新冠病毒的中和抗体。
本发明属于动物基因工程与动物病毒学技术领域。具体涉及一种修饰的猪圆环病毒2型ORF2基因及其应用。其特征在于，将人组织纤维蛋白溶酶原激活剂的信号肽序列替换天然ORF2基因N－端的41个氨基酸，并缺失ORF2基因终止子，在其C端融合禽流感病毒HA基因跨膜区序列而获得的一种修饰型ORF2基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。表达所述基因的真核质粒pcDNA－spORF2△41TM的大肠杆菌DH5α/pcDNA－spORF2△41TM，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO：M207069。本发明还公开了该基因与质粒在制备猪断奶多系统衰竭综合症疫苗中的应用。
