本发明涉及生物工程技术领域,具体涉及猪粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子重组蛋白及其制备方法和应用。本发明提供的猪粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子重组蛋白为以下1)或2)中的蛋白:1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;2)氨基酸序列为在SEQ ID NO.1所示序列的N端和/或C端添加蛋白标签和/或酶切位点后得到的序列。该重组蛋白具有较高的活性,能够有效刺激巨噬细胞的增殖和特性维持,能够在大肠杆菌中高效表达,可用于巨噬细胞的体外培养并以此巨噬细胞为基础,进行非洲猪瘟病毒等病毒的培养,为后续猪源GM‑CSF的生产和应用奠定了基础。