本发明公开了一种人源Ⅲ型胶原蛋白及其制备方法，所述人源Ⅲ型胶原蛋白表达体系的构建方法为：将人源Ⅲ型胶原蛋白的基因片段插入修改后的质粒中得到重组质粒，将重组质粒线性化后电转化毕赤酵母得到重组工程菌，通过高浓度抗生素筛选得到高表达的菌株。所述人源Ⅲ型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，具体为III型胶原蛋白的306～732位氨基酸片段。本发明提供的人源Ⅲ型胶原蛋白表达体系表达的人源Ⅲ型胶原蛋白不包含标签蛋白和信号肽蛋白，为完全人源胶原蛋白。本发明筛选得到的高表达菌株稳定性强，在诱导表达第9d仍未出现明显的降解，其诱导表达第9d的人源Ⅲ型胶原蛋白产量为0.47g/L。
