本发明提供了一种重组鼠疫F1(rF1)抗原及其制备方法与应用,所述的rF1抗原为带有或不带有标签的以下蛋白:(a)如SEQ ID No:2所示氨基酸序列去除N端10~21位氨基酸后的氨基酸序列组成的蛋白;或(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与(a)具有相同功能的由(a)衍生的蛋白以及专用于制备该rF1的引物、重组载体与转化体。本发明同时还涉及在制备rF1的方法中的专用引物、重组载体与转化体,以及以该rF1制成的鼠疫抗体诊断胶体金试纸条。本发明的rF1具有较好的免疫学活性,制备成的鼠疫诊断金标试纸条的敏感性高于目前使用的以天然F1为基础的试纸条。