本发明属于有机化学合成领域,具体涉及一种N‑(9‑笏基甲氧羰基)‑癸基氨基乙醛的生物酶合成方法,采用的生物酶为苹果酸脱氢酶突变体,具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,利用定向酶突变技术得到的苹果酸脱氢酶突变体将伯醇氧化成醛。得到N‑(9‑笏基甲氧羰基)‑癸基氨基乙醛转化率为85.01%。与未突变野生型的硝基还原酶相比具有更高的反应效率和转化率。采用生物酶合成法替代传统的纯化学合称法有效的降低了三废的排放,符合绿色化学趋势。
本发明设计羟基类固醇脱氢酶,具体涉及7β羟基类固醇脱氢酶突变体。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,是将野生型7β羟基类固醇脱氢酶的第181位缬氨酸、189位苏氨酸、207位的缬氨酸分别替换为半胱氨酸、缬氨酸、半胱氨酸。突变体的酶活是野生型的2.59倍,热稳定性是野生型的5倍,且酶催化的转化率能够达到99.9%,作为酶法制备熊去氧胆酸的关键酶,表现了极具工业化应用价值的特性。