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[发明专利]一种缓解焦虑或抑郁的益生菌组合物及其应用-CN202010601490.6有效
发明人：刘海峰;刘红;皮婷婷;李青山 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2020-06-28 - 公布日： 2023-01-17 - 主分类号： A23L2/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种缓解焦虑或抑郁的益生菌组合物及其应用。所述益生菌组合物包含益生元、K‑KLJ益生菌组合和功能性物质，所述K‑KLJ益生菌组合含有植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌中的至少一种，或者还包括鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌中的至少一种。本专利发明的益生菌组合物可以显著提升肠道有益菌群的数量，改善肠道不适，减少慢性炎症，从而减少不良的情绪，防治抑郁和焦虑等情绪疾病。而且本专利发明的益生菌株组合之间，以及益生元，益生菌菌株与功能性物质之间具有显著的协同增强作用。
一种缓解焦虑抑郁益生菌组合及其应用

[发明专利]可在肠道中催化尿酸降解的组合物及其制备方法和应用-CN201910095135.3有效
发明人：刘海峰;刘艳红;陈火晴;刘红;黄荷 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2019-01-31 - 公布日： 2022-03-22 - 主分类号： A61K36/068 文献下载
摘要：本发明是关于一种可在肠道中催化尿酸降解的组合物，所述组合物含有蛹虫草菌粉或干酶粉，所述蛹虫草菌粉或干酶粉包含可催化尿酸降解的尿酸氧化酶。本发明还提供了上述本发明关于一种可在肠道中催化尿酸降解的组合物的制备方法和应用。本发明的组合物可通过催化尿酸降解为尿囊素，降低肠道中的尿酸含量，增加血液中尿酸向肠道中分泌排泄的比例，从而降低血液中的尿酸浓度，预防和治疗高尿酸血症及痛风疾病；同时也降低了尿液中尿酸的排泄量，降低尿酸结石的发病率。
肠道催化尿酸降解组合及其制备方法应用

[发明专利]生产草酸氧化酶的大肠杆菌表达系统、草酸氧化酶的生产方法及其应用-CN201810864547.4有效
发明人：汪小锋;吴玉峰;汪卫;刘艳红;陈火晴 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2018-08-01 - 公布日： 2021-07-20 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了生产草酸氧化酶的大肠杆菌表达系统、草酸氧化酶的生产方法及其应用。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒包含：草酸氧化酶基因、分子伴侣基因和促进锰离子泵入大肠杆菌细胞相关蛋白的基因。本发明通过对不同的锰离子相关蛋白的基因及其拷贝数，控制分子伴侣表达的启动子种类，以及草酸氧化酶的生产过程所用的培养基种类进行筛选和测试，获得草酸氧化酶的优化表达组合，使得草酸氧化酶在大肠杆菌中的表达活力超过80U/mL。细胞破碎液上清初步纯化的草酸氧化酶的比活力大于20U/mg，单体分子量大小在25kDa左右。本发明技术方案具有生产和纯化工艺简单，表达量和比活力高，易于工业放大，成本低，有利于这类酶的工业化生产和应用等优势。
生产草酸氧化酶大肠杆菌表达系统方法及其应用

[发明专利]用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用-CN201810865726.X有效
发明人：汪小锋;吴玉峰;汪卫;刘艳红;陈火晴 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2018-08-01 - 公布日： 2021-07-20 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用。所述用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，包含：草酸脱羧酶基因、分子伴侣基因和调控胞内锰离子浓度的基因。本发明将所述重组质粒导入大肠杆菌表达菌株和MntP基因缺失的大肠杆菌中，均得到可溶表达且有活性的草酸脱羧酶。并对重组菌株的培养温度和诱导温度进行了优化，发现培养温度为37℃，诱导温度为25℃时，草酸脱羧酶的表达量较高。通过有机溶剂沉淀和硫酸铵沉淀两步简单纯化，草酸脱羧酶比活力能达到45.6U/mg，纯度超过95％。本发明技术方案具有生产和纯化工艺简单，草酸脱羧酶的表达量和比活力高，易于工业放大，成本低，有利于草酸脱羧酶的工业化生产和应用。
用于生产草酸脱羧酶重组质粒大肠杆菌表达系统方法应用

[发明专利]含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法-CN201810863252.5有效
发明人：汪小锋;吴玉峰;汪卫;刘艳红;陈火晴 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2018-08-01 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒为以下几种情形之一或其组合：(1)至少包含大肠杆菌分子伴侣基因和含锰离子的酶蛋白基因；(2)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因，以及过表达或抑制锰离子通道相关蛋白基因；(3)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因，以及影响胞内的锰离子浓度相关蛋白基因。通过所述大肠杆菌表达系统的构建及优化，可实现含锰离子酶蛋白的高效可溶且有活性的表达，相比传统方法效率高、纯化工艺简单、成本低，有利于含锰离子酶的工业化生产和应用。
离子重组蛋白大肠杆菌表达系统及其应用方法

[发明专利]重组表达草酸氧化酶的基因工程菌及其构建方法和应用-CN201810180114.7有效
发明人：汪卫;汪小锋;刘艳红;黄荷 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2018-03-05 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组表达草酸氧化酶的基因工程菌及其构建方法和应用，涉及基因工程领域。该基因工程菌的构建方法包括以下步骤：将来源于虫拟蜡菌的草酸氧化酶基因按照里氏木霉的密码子偏好性进行优化，得到草酸氧化酶的优化基因；敲除里氏木霉基因组中的pyr4基因和mus53基因，构建里氏木霉pyr4基因和mus53基因同时缺失的突变株；采用草酸氧化酶的优化基因构建重组表达载体；采用重组表达草酸氧化酶的载体，转化里氏木霉pyr4基因和mus53基因同时缺失的突变株，得到重组表达草酸氧化酶的基因工程菌。本发明的基因工程菌能够高效表达具有天然活性的草酸氧化酶，适用于研发重组草酸氧化酶药物、生产低草酸食品及饮料。
重组表达草酸氧化酶基因工程及其构建方法应用

[发明专利]一种增强免疫力的益生菌组合物及其应用-CN202010601465.8在审
发明人：刘海峰;刘红;皮婷婷;李青山 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2020-06-28 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： A23C9/13 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强免疫力的益生菌组合物及其应用。所述益生菌组合物包含益生元、K‑MYL益生菌组合和功能性物质，所述K‑MYL益生菌组合含有干酪乳杆菌，保加利亚乳杆菌，布拉迪酵母菌，罗伊氏乳杆菌，动物双歧杆菌中的至少一种，或者还包括鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌中的至少一种。本发明的益生菌组合物可以显著提升肠道有益菌群的数量，改善改善肠道免疫功能，提升肠道免疫因子的表达，抵抗病毒的感染以及缩短感染病毒后的恢复时间。而且本专利发明的益生菌株组合之间，以及益生元，益生菌菌株与功能性物质之间具有显著的协同增强作用。
一种增强免疫力益生菌组合及其应用

[发明专利]一种用丝状真菌宿主细胞表达的重组草酸脱羧酶-CN201810177819.3有效
发明人：汪卫;汪小锋;刘艳红;黄荷;陈火晴;陈先桥 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2018-03-05 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种用丝状真菌宿主细胞表达的重组草酸脱羧酶，重组菌株的构建方法，重组酶的生产方法及应用，属于基因工程技术领域。重组丝状真菌宿主细胞包含一个或多个拷贝的整合在其基因组中的草酸脱羧酶表达盒，所述草酸脱羧酶表达盒包括启动子、信号肽编码序列、草酸脱羧酶编码基因和终止子。上述宿主细胞可以通过随机整合或位点特异性整合两种方式构建，另外本发明还优化了针对不同重组丝状真菌宿主细胞的培养基配方。草酸脱羧酶的生产，通过表达盒的构建、载体构建、宿主细胞的构建以及最终培养积极配方的调整，使得最终获得的产率和酶活都大大提高，有效解决了现有技术中草酸脱羧酶人工生产无法大规模工业化的难题。
一种丝状真菌宿主细胞表达重组草酸脱羧酶

[发明专利]一种草酸脱羧酶的制备方法及应用-CN201710015055.3有效
发明人：汪小锋;汪卫;吴玉峰;宋保平 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2017-01-09 - 公布日： 2020-09-18 - 主分类号： C12N15/60 文献下载
摘要：本发明公开了一种草酸脱羧酶的制备方法，首先构建包含芽孢杆菌属的酸诱导启动子和分泌信号肽以及在其调控下配置的真菌来源的草酸脱羧酶基因的重组表达质粒载体，用该载体转化可以在pH≤4.5下正常生长的的芽孢杆菌，制备草酸脱羧酶重组菌。将该重组菌在发酵培养基中培养补加酸后进行诱导，通过简单纯化回收产生的胞外草酸脱羧酶。本发明方法制备的胞外草酸脱羧酶用于诊断试剂原料，药物组合物、保健食品或特殊医学用途配方食品的原料。采用突变的酸诱导启动子替换重组表达载体中的原始酸诱导启动子，转化芽孢杆菌能获得更高的表达量。
一种草酸脱羧酶制备方法应用

[发明专利]一种可溶性草酸氧化酶的制备方法及其应用-CN201710133625.9有效
发明人：汪小锋;吴玉峰;刘文山;汪卫;宋保平 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2017-03-08 - 公布日： 2020-02-21 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于高效表达可溶性草酸脱羧酶的重组表达框，同时发明一种能在大肠杆菌中高效表达可溶性且有活性的草酸氧化酶的制备方法，并将细胞破碎液上清通过硫酸铵沉淀，用柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液复溶后的含草酸氧化酶的溶液，直接用于草酸脱羧酶活力测定。这种测定方法与传统的方法如市售的测定草酸的试剂盒和HPLC法相比，精确度和灵敏度较高，耗时短，成本低，易于通过酶标仪对大量的样品进行高通量测定，具有很好的实用性。本发明中制备的草酸氧化酶还可用于其它以草酸为底物或产物的酶的活力的测定，还可用于人和动物的血液和尿液以及各种含草酸的样品中草酸含量的测定。
一种可溶性草酸氧化酶制备方法及其应用

[发明专利]食品级纳豆激酶表达菌-CN201610410811.8有效
发明人：汪小锋;汪卫;叶聪;张濛;刘艳红;马飞 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2016-06-12 - 公布日： 2019-10-29 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种食品级纳豆激酶表达菌，该重组菌是经过改造使得基因组中含有至少一个拷贝纳豆激酶基因的地衣芽胞杆菌。优选地，该表达菌基因组中负调控因子基因hrcA失活。本发明的生产菌株符合食品级表达系统的要求，纳豆激酶基因多个拷贝无痕整合到地衣芽胞杆菌基因组中表达，表达量比现有技术显著提高显著，通过失活负调控基因hrcA，酶活力和表达量进一步提高，酶活力达到1350FU/mL，蛋白含量达1.45g/L。本发明中重组菌制备的纳豆激酶，纯度较高，可以加工成保健品或作为疗脑梗塞药物的有效成分。
食品级激酶表达

[发明专利]一种在生理pH条件下有活力的草酸氧化酶及其应用-CN201710606904.2有效
发明人：王怡;汪小锋;刘海峰;汪卫 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2015-02-10 - 公布日： 2019-10-25 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种在生理pH条件下有活力的草酸氧化酶及其应用。其基因序列如SEQ ID NO.4所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，属基因工程技术领域。该草酸氧化酶在pH7.4条件下的比活力不低于其最大比活力的65.33％，因此，含有草酸氧化酶的药物可以制成针剂或经肠溶材料包埋，为研发一种适用于治疗草酸过多疾病的重组草酸氧化酶药物提供了可能性。本发明也可以使用草酸氧化酶制备预防草酸过多疾病的药物。
一种生理 ph 条件下活力草酸氧化酶及其应用

[发明专利]一种在生理pH条件下有活力的草酸氧化酶及其应用-CN201710607474.6有效
发明人：王怡;汪小锋;刘海峰;汪卫 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2015-02-10 - 公布日： 2019-09-17 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种在生理pH条件下有活力的草酸氧化酶及其应用。其基因序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，属基因工程技术领域。该草酸氧化酶在pH7.4条件下的比活力不低于其最大比活力的20％，因此，含有草酸氧化酶的药物可以制成针剂或经肠溶材料包埋，为研发一种适用于治疗草酸过多疾病的重组草酸氧化酶药物提供了可能性。本发明也可以使用草酸氧化酶制备预防草酸过多疾病的药物。
一种生理 ph 条件下活力草酸氧化酶及其应用

[发明专利]一种芽胞杆菌多基因叠加敲除方法-CN201610567805.3有效
发明人：汪小锋;汪卫;张媛;刘艳红;印容;叶聪 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2016-07-19 - 公布日： 2019-05-07 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种芽胞杆菌多基因叠加敲除方法，是将芽胞杆菌多个待敲除基因的上下游同源臂基因片段插入到温敏型质粒中，转化芽孢杆菌，通过高温培养迫使芽胞杆菌中的敲除质粒与其基因组DNA发生同源单交换，高温传代培养筛选双交换的菌株。提取多个基因单交换成功菌株的基因组DNA，限制性内切酶消化后，回收DNA片段，转化单基因成功实现无痕敲除的菌株，进行双交换筛选，叠加敲除成功的菌株作为下一轮叠加敲除的宿主菌，依次叠加最终实现芽胞杆菌多基因的敲除。用温敏型质粒实现芽胞杆菌基因的无痕敲除，以单交换的宿主基因组DNA转化芽胞杆菌不仅能提高转化效率，还能有效避免宿主菌中已敲除基因的回复，显著提高多基因叠加敲除效率。
一种杆菌多基因叠加方法

[发明专利]芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒-CN201610002428.9有效
发明人：汪小锋;汪卫;刘艳红;张媛;印容;叶聪 -专利权人： 武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2016-01-06 - 公布日： 2018-11-09 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒，该芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒的基因组中含有：仅一种正筛选标记的抗性基因；能在大肠杆菌中复制的复制子；能在芽胞杆菌中复制的温敏型复制子；至少一个I‑Scel酶切位点；仅一种显色蛋白基因；其中，抗性基因和显色蛋白基因前的启动子均为芽胞杆菌中的组成型启动子。本发明还提供一种用于提高上述质粒敲除或敲入效率的辅助质粒，其基因组中含有的抗性基因和显色蛋白基因不同于上述敲除/入质粒。采用上述两种质粒，可以连续或迭代修饰芽胞杆菌基因组中一个或多个目的DNA序列，应用于芽胞杆菌的遗传改造、代谢过程研究、功能基因组研究和工业化应用研究等多种领域。
杆菌基因无痕敲质粒方法试剂盒

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