本发明公开了一种猴泡沫病毒的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。所述引物和TaqMan探针,是根据SFV pol基因的保守区域设计的,用以定量检测猴淋巴细胞或相关生物制品中SFV的核酸拷贝数。具体来讲,所述引物的上游引物具有序列表中SEQ ID NO:1的核苷酸序列,下游引物具有序列表中SEQ ID NO:2的核苷酸序列;所述TaqMan探针具有序列表中SEQ ID NO:3的核苷酸序列。本发明能准确的检测出猴群SFV的感染情况及相关生物制品中SFV的残留状况,对控制实验猴群的质量及在进出口动物检验检疫领域中具有重要意义,能够保证相关生物制品的质量,对于控制SFV传播和人民用药安全意义重大。本发明的检测方法及试剂盒可用于恒河猴及相关生物制品的猴泡沫病毒检测,应用前景广阔。