本发明涉及基因工程技术领域，具体公开了一种重组耶氏解脂酵母菌株及其构建方法和应用。本发明所述重组耶氏解脂酵母菌株基因组包含SEQ ID NO1‑3任意一项所示的核苷酸序列。本发明通过OE‑PCR方法构建单基因表达盒表达的菜油甾醇生物合成途径中关键基因dhcr7，用限制性内切酶将单基因表达盒切下并一次性转入酵母进行片段间的同源重组和基因组特定erg5位点的整合，通过营养缺陷型培养基和基因组PCR筛选完整组装的转化子，获得一种新颖的重组耶氏解脂酵母菌株，能够应用于菜油甾醇的生物合成中，并保持较高产量。
