本发明涉及分子生物学检测领域,提供了一种具有单碱基特异性的转基因作物鉴定方法。该方法包括:以靶标DNA为模板,使用带生物素标记的PCR引物组、RPA引物组进行反应,得到PCR或RPA扩增产物;PCR引物组包括序列如SEQ ID NO:1所示的第一正向引物和序列如SEQ ID NO:2所示的第一反向引物;RPA引物组包括第一、第二、第三RPA引物组,三个RPA引物组的正向引物序列分别如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示,第二反向引物的序列如SEQ ID NO:4所示;将PCR或RPA扩增产物加入存在单碱基特异性探针的检测体系中进行检测,得到鉴定结果。本发明具有单碱基特异性,可实现转基因作物的鉴定,具有准确性高、灵敏度好、检测速度快、操作简便和成本低等优点。
本发明公开了一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC‑1905的设计及其应用,涉及转基因安全领域中转基因油菜的安全监管和筛查检测技术。pYCSC‑1905的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。利用pYCSC‑1905作为阳性对照和质控样品,能对油菜及其产品进行转基因成分的普通PCR和实时荧光PCR筛查检测,对目前已知遗传信息的转基因油菜的覆盖率为100%;本发明解决了转基因油菜筛查检测中缺乏阳性对照或标准品的技术难题,避免了筛查检测中针对多个检测靶标设置多个阳性对照的问题,降低了制备多个阳性对照的人力成本和经济成本。
本发明公开了一种转基因油菜及其产品转化体鉴定阳性质粒分子pYCID‑1905的设计及其应用,涉及转基因安全领域中转基因油菜的安全监管和转化体鉴定技术。pYCID‑1905的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。利用pYCID‑1905作为阳性对照和质控样品,能对油菜及其产品进行转化体的普通PCR和实时荧光PCR鉴定检测,对我国批准和将批准转基因油菜品种的覆盖率为100%;本发明解决了转基因油菜转化体鉴定检测中缺乏阳性对照或标准品的技术难题,避免了品系鉴定检测中针对每个检测靶标设置阳性对照的问题,降低了制备每个油菜转化体阳性对照的人力成本和经济成本。