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[发明专利]一种牛胚胎玻璃化冷冻甩管解冻和直接移植方法-CN201510015346.3有效
发明人： 朱士恩;傅祥伟;周艳华;张有文 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2015-01-12 - 公布日： 2016-08-24 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明提供一种牛胚胎玻璃化冷冻甩管解冻和直接移植方法，属于胚胎低温生物学技术领域。本发明方法包括(1)牛胚胎冷冻用细管中先加入一段解冻液，然后装入一段空气；(2)装入一段冷冻液，再装入一段空气；(3)装入一段冷冻液，并在该段冷冻液中置入牛胚胎，再装入一段空气；(4)装入一段解冻液并封闭管口，冷冻；(5)甩管解冻，直接移植；冷冻液为含有EG、聚蔗糖和蔗糖的mPBS溶液，解冻液为含FBS的mPBS溶液。本发明方法操作简便，对操作人员技术要求不高，冷冻后的牛胚胎甩管解冻后可直接移植，解冻后的胚胎存活率100％，扩张率94％，移植后妊娠率达57％，是一种高效、简便易行的方法，适用于产业化推广。
种牛胚胎玻璃化冷冻解冻直接移植方法

[实用新型]一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体-CN201520890737.5有效
发明人：傅祥伟;朱士恩;田见晖;侯云鹏 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2015-11-09 - 公布日： 2016-05-04 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本实用新型公开了属于细胞玻璃化冷冻技术领域的一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体。该玻璃化冷冻载体包括尼龙环、金属杆、塑料手柄和塑料套管；其中，尼龙环、金属杆和塑料手柄依次固定连接，塑料套管套在塑料手柄靠近金属杆的一端。该玻璃化冷冻载体较传统的尼龙环载体更易于操作和标记，而且冷冻速度快、效率高，减少了冷冻过程对细胞的冷冻损伤，同时制作成本低，适应性好。
一种细胞胚胎玻璃化冷冻载体

[发明专利]一种促进冷冻胚胎解冻后体外发育的培养液-CN201110142477.X有效
发明人：刘国世;朱士恩;田秀芝;史文清;张洪海 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2011-05-30 - 公布日： 2011-11-23 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明提供了一种促进胚胎OPS法玻璃化冷冻解冻后体外发育的培养液，其是将冷冻2-细胞胚胎解冻后在含10-9mol/L褪黑素(MT)的培养液中进行培养，提高了胚胎的囊胚发育率、增加胚胎内细胞数，从而提高胚胎的质量，并为进一步开展家畜胚胎的OPS冷冻保存研究提供有益的参考。
一种促进冷冻胚胎解冻体外发育培养液

[发明专利]一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻保存方法及其冷冻载体-CN201010122791.7无效
发明人： 朱士恩;李俊杰;王彦平;侯云鹏 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2010-03-11 - 公布日： 2010-07-21 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种人体、动物或其局部的保存方法及其冷冻载体，尤其涉及一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻保存方法及其冷冻载体。所述方法包括：冷冻液配制步骤、解冻液配制步骤、冷冻步骤和解冻步骤，其特征在于，所述冷冻步骤和解冻步骤中所用的冷冻载体为冷冻网，所述冷冻网包括：网体和网柄。本发明提供了一种操作简单、速度快、效率高的卵母细胞或胚胎玻璃化冷冻方法及其冷冻载体。
一种细胞胚胎玻璃化冷冻保存方法及其载体

[发明专利]胚胎的玻璃化冷冻、简易解冻和直接移植法-CN200510004912.7无效
发明人： 朱士恩;杨中强;侯云鹏 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2005-01-28 - 公布日： 2005-08-17 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种玻璃化胚胎冷冻、解冻和直接移植方法，属胚胎生物技术领域。技术方案包括：将冷冻液和解冻液分段装入细管，每段液体用空气隔开，其中一段冷冻液中置入了胚胎，后封口细管、投入液氮，特征是，装入细管内的冷冻液和解冻液各有两段，冷冻液与解冻液的体积比小于或等于1∶5，或混合后混合液中抗冻保护剂的浓度在2.0Mol/L以内。本发明的简易解冻和移植法为，在室温下，将冷冻保存胚胎的细管由液氮中取出，空气浴4～6s，20～25℃水浴，取出细管，来回颠倒甩动细管，使冷冻液混合均匀，即移植胚胎。本发明极大地简化了胚胎玻璃化冷冻后的解冻程序，实现了胚胎在管内脱毒、直接移植，简易方便，可操作性强，利于推广应用。
胚胎玻璃化冷冻简易解冻直接移植

[发明专利]一步法胚胎玻璃化冷冻保存-CN00106284.0无效
发明人： 朱士恩;曾申明;左琴;张忠诚 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2000-05-08 - 公布日： 2004-01-07 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种胚胎生物技术，特别是一种胚胎冷冻保存技术。其特点在于将葡聚糖(Dextran)和海藻糖(Trehalose)用PBS液稀释成30％和0.5Mol/L浓度的混合液，然后与乙二醇8∶2(或7∶3或6∶4)(v/v)混合后配制成EDT20(或EDT30或EDT40)玻璃化溶液。在室温(20～25℃)下，将胚胎移入含有EDT20(或EDT30或EDT40)玻璃化溶液的0.25ml塑料细管中平衡0.5～1分钟，封口后直接投入液氮中冷冻保存。将冷冻保存的细管由液氮中取出后直接浸入20～25℃水浴中，约10秒钟完成解冻程序。
一步法胚胎玻璃化冷冻保存

[发明专利]简易高效胚胎玻璃化冷冻解冻方法-CN99121887.6无效
发明人： 朱士恩;曾申明;张忠诚;田见晖 -专利权人： 朱士恩
申请日： 1999-10-22 - 公布日： 2003-12-17 - 主分类号： A61D19/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种简易高效胚胎玻璃化冷冻解冻方法，属胚胎生物技术领域。本方法速度快、成本低、操作简单、效率高。本发明采用乙二醇(EG)或丙三醇(GL)为主体抗冻保护剂配制成EFS或GFS玻璃化溶液，浓度大于7.0Mol/L，在室温(20～25℃)下，将胚胎于10～20％EG(或GL)溶液预处理5～10min，然后移入EFS(或GFS)液中平衡30s～1min后直接投入液氮。本方法冷冻保存的小鼠原核胚～孵化囊胚，其成活率均能达到95％左右，并获得了较高的移植妊娠率(60～75％)。本方法对其他家畜如兔、牛和绵羊胚胎的冷冻保存也获得了基本相同的效果。
简易高效胚胎玻璃化冷冻解冻方法