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[发明专利]一种检测凋落物乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的方法-CN202010063061.8有效
发明人：刘兵;曲朝磊;徐杰;马阳;耿莉;杨艺红;孙辉 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2020-01-19 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测凋落物乙酰氨基葡萄糖苷酶活性的方法，属于酶活检测技术领域。本发明提供的方法为：将凋落物样品破碎后装到离心过滤管中，添加培养缓冲液低温培养后高速离心并混合滤液定容至一定体积，制备灭活酶液；将酶活性液和灭活酶液依次分别添加酶活性孔和阴性对照孔，再添加4‑MUB‑β‑D‑乙酰氨基葡萄糖苷工作液，在遮光条件下震荡培养；培养后，向所有酶标孔添加Tris终止液；利用多功能酶标仪进行MUB荧光检测；计算乙酰氨基葡萄糖苷酶比酶活。本发明采用离心过滤管，降低了酶液中的干扰物质；优化了反应体系，灵敏度高，酶液耗量少，反应终止后，测试液pH对上机数据没有影响，真实有效反映凋落物中酶活性。
一种检测凋落乙酰氨基葡萄糖苷酶活性方法

[发明专利]一种检测凋落物β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法-CN202010062495.6在审
发明人：刘兵;耿莉;刘怡;徐杰;曲朝磊;杨艺红;孙辉 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2020-01-19 - 公布日： 2021-01-12 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测凋落物β‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，涉及凋落物酶活性检测的技术领域。该方法包括以下步骤：1)在凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到酶活测试液；并制备灭活对照酶液；2)制作MUB浓度与吸光值之间关系的标准曲线；3)将酶活测试液和灭活对照酶液分别添加到酶活测试孔和阴性孔，然后加入4‑MUB‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；4)根据标准曲线，计算β‑葡萄糖醛酸苷酶比酶活。本发明酶液耗量少、操作强度小；灵敏度呈数量级提高；且测试液pH对上机数据没有影响，能够真实反映凋落物中酶活性。
一种检测凋落葡萄糖醛酸活性方法

[发明专利]一种基于实时荧光定量PCR检测土壤细菌数量的方法-CN202010063347.6在审
发明人：刘兵;马阳;曲朝磊;徐杰;耿莉;孙辉 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2020-01-19 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR检测土壤细菌数量的方法，属于生物技术领域。本方法包括以下步骤：1)提取土壤样品总DNA并调整到预设浓度，制备成待测土壤样品模板DNA溶液；2)提取模板大肠杆菌总DNA，测定DNA浓度，并制备标准曲线模板DNA溶液；3)对待测土壤样品模板DNA溶液和标准曲线模板DNA溶液进行实时荧光定量PCR扩增；4)绘制出标准曲线；5)计算每克干土中细菌数量。本方法省去添加内标菌株荧光镜检等步骤，大大降低操作难度；且不需要经过连接、转化，再以qPCR扩增，操作简便易学；目标片段特异性好，数据精准度高，重现性好。
一种基于实时荧光定量 pcr 检测土壤细菌数量方法

[发明专利]一种基于实时荧光定量PCR检测土壤真菌数量的方法-CN202010063983.9在审
发明人：刘兵;曲朝磊;马阳;徐杰;刘怡;杨艺红;孙辉 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2020-01-19 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR检测土壤真菌数量的方法，属于土壤真菌数量检测领域。本发明公开的方法主要包括：称取过筛的新鲜土壤，利用试剂盒提取土壤总DNA，统一稀释到一定浓度；将生长适度的模板射纹革菌的菌丝利用CTAB法提取总DNA，制备成标准曲线系列模板DNA溶液；将标准曲线或待测土壤模板DNA溶液构建qPCR反应体系，包括根据真菌18S核糖体rRNA保守序列设计的通用qPCR引物；利用ABI7500实时荧光定量PCR仪进行qPCR反应；绘制出标准曲线；计算每克干土中真菌数量。本发明提供的检测土壤真菌数量的方法，操作安全简便，引物序列特异性好，灵敏度高，结果精准可靠，重现性好。
一种基于实时荧光定量 pcr 检测土壤真菌数量方法