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[发明专利]一种乙醇脱氢酶突变体及其应用-CN202210988745.8有效
发明人：王峰;陈倩;王俊超;桂文君;高敏奇 -专利权人： 无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-08-17 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种乙醇脱氢酶突变体及其应用，涉及蛋白质工程技术领域，所述乙醇脱氢酶突变体由乙醇脱氢酶突变序列和N端依次融合HRV3C酶切位点和6His标签构成，所述突变序列中的突变为V63Y、T122L、G162Y、Q202M、A219M、D268N、N291M和A385M。本发明使其与野生型的乙醇脱氢酶相比具有更高的热稳定性，野生型Tm值为61.25℃、突变体Tm值为66.1℃，较野生型增加了近5℃，为该酶在工业生物催化制药过程中的应用提供了良好的应用场景。该突变体的蛋白产量也比野生型高出2倍。
一种乙醇脱氢酶突变体及其应用

[发明专利]SortaseA酶作为蛋白水解酶在蛋白纯化领域中的应用-CN202210808934.2有效
发明人：王峰;陈倩;桂文君;王俊超;黄亚亮 -专利权人： 无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-07-11 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本发明公开了SortaseA酶作为蛋白水解酶在蛋白纯化领域中的应用，涉及蛋白质工程技术领域，SortaseA酶作为蛋白水解酶的反应条件为：50mMTris‑HCl，pH7.5，500mMNaCl,5％glycerol,5mMDTT,0.1MTrehalose，1mMEDTA,5mMGlycine,1mMCaCl2。本发明提供了一种利用SortaseA酶水解酶活性作为一种新的蛋白水解酶在蛋白纯化过程中融合标签切除的应用。通过优化SortaseA酶的反应条件，增强其水解酶活性，从而使其作为一种新的蛋白水解酶，SortaseA与常用的TEV酶相比具有产量高、热稳定性高且酶切效率更高等特点且经Sortase酶酶切后的产物可以实现任一标记修饰如生物素标记、荧光标记等。
sortasea 作为蛋白水解纯化领域中的应用

[发明专利]一种改造的D-阿洛酮糖3-差向异构酶及其应用-CN202210856853.X有效
发明人：王峰;吕志佳;桂文君;陈倩;王俊超 -专利权人： 无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-07-20 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种改造的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其应用，涉及蛋白质工程技术领域，该改造DTEase酶由DTEase序列和C端融合的多聚精氨酸标签构成，命名为DTEase‑5R。通过对解纤维素梭菌DTEase蛋白序列的C端添加RRRRR标签，使其产量比之前提高了5.5倍，Tm值增加了7℃，本发明提供的DTEase在工业生产D‑阿洛酮糖的应用中具有更好的应用场景。
一种改造阿洛酮糖差向异构及其应用

[发明专利]一种葡萄糖脱氢酶突变体及其应用-CN202310617801.1在审
发明人：王峰;陈倩;桂文君;王俊超;邵志鹏 -专利权人： 无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2023-05-30 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种葡萄糖脱氢酶突变体及其应用，涉及蛋白质工程技术领域，所述葡萄糖脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的葡萄糖脱氢酶突变体通过将葡萄糖脱氢酶蛋白序列的第52位的精氨酸突变成天冬氨酸，第114位的甘氨酸突变成丙氨酸，第228位的脯氨酸突变成丙氨酸，第241位的丝氨酸突变成谷氨酰胺，使其与野生型的葡萄糖脱氢酶相比具有更高的热稳定性，野生型Tm值为63.74℃、突变体Tm值为79.3℃，较野生型增加了15℃，且突变体的辅酶也从无到有，其中NADP活性比野生型高出近6.5倍，NAD活性也比野生型高出3.4倍，为该酶在工业生物催化制药过程中的应用提供了良好的应用场景。
一种葡萄糖脱氢酶突变体及其应用

[发明专利]一种重组SortaseA酶及其固定化方法和应用-CN202310360094.2在审
发明人：王峰;陈倩;桂文君;高敏奇;黄亚亮 -专利权人： 无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2023-04-06 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，具体公开了一种重组SortaseA酶及其固定化方法和应用，通过在SortaseA酶的末端引入一个半胱氨酸，利用巯基共价偶联的原理，将SortaseA酶固定到商品化的偶联树脂上，反应结束后，只需要通过简单的离心方法，即可将SortaseA酶去除，该方法大幅度地减少了操作的时间、实现了基本以零成本的方式去除了反应中多余的SortaseA酶，提高了SortaseA酶在蛋白质的合成与修饰中的应用价值。
一种重组 sortasea 及其固定方法应用

[发明专利]一种葡萄糖脱氢酶突变体及其蛋白质晶体和应用-CN202210396377.8有效
发明人：王峰;王俊超;桂文君;成望;吕志佳 -专利权人： 无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-04-15 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，具体公开了一种葡萄糖脱氢酶突变体及其蛋白质晶体和应用，即提供了一种以葡萄糖为底物的来源于氧和葡萄球菌的葡萄糖脱氢酶突变体，该突变体通过将葡萄糖脱氢酶蛋白序列的第259位的天冬氨酸突变成半胱氨酸，使其与野生型的葡萄糖脱氢酶相比具有更高的热稳定性，野生型Tm值为64℃、突变体Tm值为73℃，较野生型增加了近10℃，且突变体的产量也比野生型高出2倍。此外，本发明还提供了该酶的蛋白质晶体，为进一步改造高活性、高稳定性的葡萄糖脱氢酶提供了研究基础。
一种葡萄糖脱氢酶突变体及其蛋白质晶体应用