本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种编辑绵羊FecB基因同源重组基因编辑材料及其在制备FecB基因型绵羊胚胎中的应用,包括如SEQ ID NO.1所示的FecB‑sgRNA序列和如SEQ ID NO.2所示的FecB‑ssODN序列。利用本发明的同源重组基因编辑材料电转至绵羊受精卵中,可实现BMPRIB基因编码区746碱基A精准突变为G,即为FecB基因。采用本发明提供的方法,绵羊胚胎基因组发生同源重组胚胎超过70%,其中完成完全精准突变的胚胎比值达25%。利用本方法可高效快速获得大量的绵羊FecB基因型胚胎。
本发明涉及基于HDR基因编辑方法培育短尾绵羊用核酸分子、试剂盒及方法和应用,属于细胞工程和基因工程技术领域。本发明提供了一种基于HDR基因编辑方法培育短尾绵羊用sgRNA,所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述sgRNA能够对绵羊TBXT基因进行精准突变的编辑,所获得的基因编辑绵羊及其后代的尾巴变短、尾椎数显著减低,同时原有的生产性能保持不变。
本发明提供了一种编辑绵羊FGF5基因实现选择性剪接的sgRNA、成套核酸分子和应用,属于细胞工程和基因工程技术领域,所述sgRNA由如SEQ ID No.1~6所示的核苷酸序列退火得到;所述SEQ ID No.1和SEQ ID No.2两两退火;所述SEQ ID No.3和SEQ ID No.4两两退火;所述SEQ ID No.5和SEQ ID No.6两两退火。本发明提供的sgRNA能够实现对绵羊FGF5基因选择性剪接的编辑。
本发明提供了一种用于精准编辑绵羊OCT4基因的sgRNA、扩增用引物和应用,属于基因工程和细胞工程技术领域。一种用于精准编辑绵羊OCT4基因的sgRNA,其特征在于,所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述sgRNA在敲除绵羊OCT4基因中的应用。本发明设计的OCT4‑sgRNA靶向OCT4基因第二外显子区域进行识别和删除。实验表明,将所述sgRNA通过基因编辑技术敲除绵羊OCT4基因,经过测序统计,基因编辑效率达到56.7%,与其他针对绵羊OCT4基因的sgRNA的基因编辑效率相比,具有显著优势,为后续研究绵羊OCT4基因在早期胚胎发育中的调控作用奠定基础。
本发明提供了一种实现绵羊FGF5基因精准突变的sgRNA、试剂盒和应用,属于基因编辑技术领域,所述sgRNA由SEQ ID No.1所示的正向引物和SEQ ID No.2所示的反向引物退火获得;所述试剂盒,包括所述的sgRNA、FGF5‑单链寡核苷酸ssODN、Cas9 mRNA和DNA连接酶IV抑制剂SCR7。本发明提供的sgRNA、试剂盒及方法能够实现绵羊FGF5基因的高效、精准突变;能够用于绵羊育种,应用前景好。
本发明公开了巴音布鲁克羊的育种方法及所用巴音布鲁克羊毛色性状的Indel分子标记,涉及分子标记技术领域。本发明具体公开了巴音布鲁克羊育种的方法,所述方法包括选择基因型为II的黑头巴音布鲁克羊作为亲本进行育种,所述II是巴音布鲁克羊基因组DNA中含有核苷酸序列是SEQ ID No.1的DNA片段的纯合型。该方法可以可以快速鉴定出突变纯合子和杂合子的黑头巴音布鲁克羊,在育种过程中,剔除杂合子,可加快毛色一致,遗传稳定的巴音布鲁克羊育种进程。