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[发明专利]一种高效合成α-氨基丁酸的单细胞工厂及其构建与应用-CN201611006643.2有效
发明人：饶志明;周俊平;杨套伟;张显;徐美娟;张蔡喆;戚云龙;郑俊贤 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-11-16 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效合成α‑氨基丁酸的单细胞工厂及其构建与应用，属于微生物技术领域。本发明将L‑苏氨酸脱氨酶、L‑氨基酸脱氢酶及提供辅因子NADH循环的脱氢酶基因串联表达构建重组的大肠杆菌单细胞工厂用于α‑氨基丁酸高效合成，通过rbs序列优化控制L‑苏氨酸脱氨酶的表达量，解决中间产物酮丁酸的快速积累而抑制转化的问题，同时通过启动子及rbs序列优化控制提供辅因子NADH循环的脱氢酶表达量，增强NADH再生速率最终增加产量。利用单细胞工厂进行全细胞转化可减少物质进出障碍加快转化速率，促进辅因子胞内循环而无需外源添加，成本低廉。在20h内，5L发酵罐中重组大肠杆菌单细胞工厂产量为204g/L，时空产率10.2g/L·h，为其工业化生产提供实际有效策略。
一种高效合成氨基丁酸单细胞工厂及其构建应用

[发明专利]一种辅酶高效再生体系的构建及其应用-CN201510817220.8有效
发明人：饶志明;周俊平;杨套伟;张蔡喆;戚云龙;郑俊贤;张显;徐美娟 -专利权人：江南大学
申请日： 2015-11-23 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明是一种串联氨基酸脱氢酶及密码子优化的甲酸脱氢酶重组大肠杆菌制备α-氨基丁酸的方法。首先，按照大肠杆菌的密码子偏好对博伊丁假丝酵母菌甲酸脱氢酶基因序列进行密码子优化。对甲酸脱氢酶密码子优化后可以显著提高其在大肠杆菌中的表达量，增加α-氨基丁酸的产量，同时共表达甲酸脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶于大肠杆菌中可以促进辅因子在菌体胞内的循环，可以不需要添加任何外源辅因子，另外利用全细胞转化大宗化学品L-苏氨酸生产α-氨基丁酸过程简单快捷，成本低廉。在5L发酵罐中该方法所得的α-氨基丁酸产量可达81.5g/L，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
一种辅酶高效再生体系构建及其应用