本发明提供一种检测铜绿假单胞菌重要耐药基因的基因芯片及其试剂盒。该基因芯片包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针,该探针包含从carb,tem,imp,oxa groupI,oxa group II,aac(6’)-Ib,aac(6’)-II,aac(3’)-I,aac(3’)-II,aadB及细菌16S rRNA基因中选取的DNA片段或其互补DNA片段。利用上述基因芯片及检测试剂盒可以达到同时检测铜绿假单胞菌上述10种耐药基因的目的,具有针对性强,特异性强,灵敏度高,检测速度快,重复性好等特点,适于医院、疾病预防控制机构及其他临床实验室对铜绿假单胞菌进行耐药基因检测和耐药性监控。