本发明公开了一种全猪源猪流行性腹泻病毒单克隆抗体,所述单抗包括重链、轻链可变区和重链、轻链恒定区,所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示,所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。本发明还公开了一种抗原表位肽,所述抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示,该抗原表位肽能够与所述单克隆抗体特异性结合。本发明提供的单抗是运用单个B细胞抗体技术从猪体内获得的,该抗体可以与PEDV多种毒株反应,具有特异性强、灵敏度高等优点,利用该抗体获得的抗原表位是PEDV在猪体内产生抗体的真实表位,并且该表位相对保守。本发明为PEDV诊断试剂盒的研制奠定了基础。