本发明公开了一种基于核酸质谱技术检测毛霉菌的引物组及其应用,属于分子生物学技术领域。该引物组的序列如SEQ ID NO.1‑21所示,包括扩增和检测毛霉菌的引物对和特异性的单碱基延伸引物,利用该引物组,将样本经过DNA提取、富集扩增、消化和延伸反应处理后可直接用于核酸质谱检测。本发明可以同时检测包括根霉属、毛霉属、横梗霉属、根毛霉属、小克银汉霉属、鳞质霉属、瓶霉属、共头霉属和科克霉属在内的9种人类毛霉病中常见的病原菌,具有较高的检测特异性,且操作简单,对于毛霉病的早期诊断具有重大意义。
本发明公开了一种基于核酸质谱技术检测分枝杆菌的引物组及其应用,属于分子生物学技术领域。该引物组的序列如SEQ ID NO.1‑85所示,利用上述引物组对样本进行处理的步骤如下:(1)样本DNA提取;(2)富集扩增;(3)消化反应;(4)延伸反应;样本经过上述处理后可直接用于核酸质谱检测,并可获得较高的符合率。本发明的检测范围涵盖26种分枝杆菌特异性区间和一个分枝杆菌的高度保守的检测区间,可以同时检测出26种分枝杆菌;此外分枝杆菌的高度保守的检测区间,即可以作为阳性结果的质控,又可以检测出26种分枝杆菌外的其他分枝杆菌,提示有分枝杆菌感染。
本发明公开了一种基于高通量测序检测胆管癌FGFR1/2/3融合基因的文库构建方法,属于生物技术领域。该文库构建方法包括如下步骤:(1)使用引物序列SEQ ID NO.1‑67进行多重PCR扩增获得文库;(2)文库的纯化。该方法可用于定性检测胆管癌患者包括手术切除的新鲜病理组织、甲醛固定石蜡包埋病例组织、石蜡切片等样本中FGFR1/2/3基因融合的状态,可检测33种融合形式。该方法仅需要少量RNA逆转录成cDNA作为模板,在单管完成文库的构建,操作简单方便,仅需3.5个小时完成文库构建,大大缩减了检测成本。