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[发明专利]一株耐受五羟甲基糠醛的产琥珀酸放线杆菌及其选育方法和应用-CN202111467197.6有效
发明人：秦艳;梁戈;王青艳;周志强;陆迪;罗金秀;李亿 -专利权人：广西科学院;南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2021-12-02 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一株耐受五羟甲基糠醛的产琥珀酸放线杆菌及其选育方法和应用，属于工业微生物发酵工程的技术领域。本发明提供的耐受五羟甲基糠醛的产琥珀酸放线杆菌，拉丁文为Actinobacillus succinogenes GXAS‑137HFM，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年8月10日，保藏编号为：CCTCC NO：M 20211004。本发明提供了一株耐受五羟甲基糠醛的产琥珀酸放线杆菌GXAS‑137HFM，该菌株对五羟甲基糠醛的耐受浓度为2.0～2.4g/L，相比于原始菌株产琥珀酸放线杆菌GXAS‑137大大提高了对五羟甲基糠醛的耐受性。
耐受甲基糠醛琥珀酸放线杆菌及其选育方法应用

[发明专利]一种高效生产烟酰胺单核苷酸的枯草芽胞杆菌培养基-CN202210650461.8在审
发明人：李晓明;卢运琨;梁树华;韦航;李丛;陆迪;于春娇 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2022-06-10 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，且公开了一种高效生产烟酰胺单核苷酸的枯草芽胞杆菌培养基，其包括如下组分：碳源20‑50g/L，酵母浸膏5‑20g/L，钠盐0.2‑2g/L，钾盐1‑10g/L。该高效生产烟酰胺单核苷酸的枯草芽胞杆菌培养基，提供组分优化的发酵培养基，以用于利用重组枯草芽孢杆菌高效发酵生产烟酰胺单核苷酸，通常培养基优化的目的是利用高密度培养以获得更多的菌体，从而得到更高的表达产物，然而，这个办法对于利用重组枯草芽孢杆菌发酵转化烟酰胺得到烟酰胺单核苷酸并不适用，因此，本发明调整发酵培养的成分，减少或剔除不利于烟酰胺单核苷酸生成的组分，提高或优化有利于烟酰胺单核苷酸生成的组分，从而获得一种高效生产烟酰胺单核苷酸的枯草芽胞杆菌培养基。
一种高效生产烟酰胺单核苷酸枯草杆菌培养基

[发明专利]一种生产烟酰胺单核苷酸的融合酶及其应用-CN202111188472.0在审
发明人：李晓明;韦航;李丛;卢运琨;周志强;梁树华;陆迪;于春娇 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2021-10-12 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，且公开了一种生产烟酰胺单核苷酸的融合酶及其应用，其氨基酸序列由烟酰胺磷酸核糖转移酶、核糖磷酸焦磷酸激酶以及一个连接肽组合而成，具体是将烟酰胺磷酸核糖转移酶与核糖磷酸焦磷酸激酶通过连接肽组合成一个融合酶。该融合酶基因可以转化到大肠杆菌或枯草芽孢杆菌中，以该菌作为菌种，烟酰胺为底物，发酵生产烟酰胺单核苷酸；或者在大肠杆菌或枯草芽孢杆菌中表达后，提取纯化该融合酶，在体外转化生产烟酰胺单核苷酸，本发明的融合酶能够显著提高烟酰胺单核苷酸的生产效率。
一种生产烟酰胺单核苷酸融合及其应用

[发明专利]一种利用重组枯草芽孢杆菌生产烟酰胺单核苷酸的方法-CN202010944821.6在审
发明人：李晓明;韦航;梁树华;卢运琨;李丛;周志强;韦旭钦;陆迪 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司;南宁市拜欧生物工程有限责任公司
申请日： 2020-09-10 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用重组枯草芽孢杆菌生产烟酰胺单核苷酸的方法。具体是将烟酰胺磷酸核糖转移酶表达元件整合到优化改造后的枯草芽孢杆菌染色体中，以该菌作为菌种，使用优化后的培养基，加入烟酰胺为底物，发酵生产烟酰胺单核苷酸。本发明的优点是：本发明利用食品安全的表达系统生产烟酰胺单核苷酸，整合型表达的重组菌株所含的外源基因能够稳定传代和表达，使用优化后的重组菌株和培养基，烟酰胺单核苷酸产量高于其他文献报道的水平。
一种利用重组枯草芽孢杆菌生产烟酰胺单核苷酸方法

[发明专利]生产(R,R)-2,3-丁二醇基因工程菌株的构建方法及其应用-CN201710509047.4有效
发明人：陈先锐;黄日波;谢能中;黄艳燕;韦航;李检秀;王青艳;李晓明 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司;广西科学院
申请日： 2017-06-28 - 公布日： 2020-11-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产(R,R)‑2,3‑丁二醇基因工程菌株的构建方法及其应用，该方法是将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和(R,R)‑2,3‑丁二醇脱氢酶基因的核苷酸序列进行密码子优化，利用人工合成的方法获得包含三个基因的基因簇；将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；将多顺反子重组质粒导入宿主菌E. coli，并敲除主要副产物合成途径的关键基因，获得生产(R,R)‑2,3‑丁二醇的基因工程菌株。本发明提供的工程菌株所用的原料来源广泛、成本低，菌株无致病性，菌株的(R,R)‑2,3‑丁二醇产量、生产效率高，最高产量可达到93.5 g/L，光学纯度可达99%以上。本发明还利用非粮木薯粉和廉价氮源作为发酵原料生产(R,R)‑2,3‑丁二醇，降低了生产成本。
生产丁二醇基因工程菌株构建方法及其应用

[发明专利]一种能提高重组普鲁兰酶表达量的信号肽突变体及其应用-CN201610125646.1有效
发明人：李晓明;黄日波;廖东庆;梁莲华;李丛;韦旭钦;王青艳;蒙健宗 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2016-03-07 - 公布日： 2020-03-20 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种能提高重组普鲁兰酶表达量的信号肽突变体及其应用。此信号肽突变体通过对来源于短芽孢杆菌(Bacillus brevis)的ɑ‑乙酰乳酸脱羧酶基因信号肽序列的N端进行饱和突变获得。突变的具体位点在将第七位的苏氨酸替换为缬氨酸。突变体信号肽与未突变信号肽相比，能提高来源于长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)的重组普鲁兰酶在枯草芽孢杆菌中的胞外表达50％以上，有很好的应用价值。
一种提高重组普鲁兰酶表达信号肽突变体及其应用

[发明专利]一种质粒载体的克隆方法及试剂盒-CN201710030080.9有效
发明人：廖东庆;黄日波;李晓明;韦旭钦 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2017-01-16 - 公布日： 2019-06-25 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明公开了一种质粒载体的克隆方法及试剂盒。1.方法是将质粒扩增为两个DNA片段，使这两个片段分别含有复制子或抗性基因筛选标记这两个功能基因，这两个片段经酶切、连接后才构成完整的复制子、抗性基因筛选标记功能基因的全部序列。这两个片段与目的DNA片段分别用可切成粘末端的限制性内切酶酶切，再用T7DNA连接酶或E.coli DNA连接酶进行连接，转化到同源重组功能缺陷的大肠杆菌进行筛选。2.试剂盒由上述从质粒扩增，并经限制性内切酶酶切、纯化处理后的两个DNA片段组成。本发明特点：1)提高目的DNA片段的克隆效率，减少假阳性；2)试剂盒使用方便、快捷。
一种质粒载体克隆方法试剂盒

[发明专利]一种普鲁兰酶突变体PulB-d99-D436H的制备方法及其应用-CN201610043739.X有效
发明人：韦旭钦;李晓明;黄日波;韦航;李丛;梁莲华;廖东庆;陆迪 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2016-01-22 - 公布日： 2018-10-09 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种普鲁兰酶突变体PulB‑d99‑D436H的制备方法及其应用，其获得方法是截取长野芽孢杆菌(Bacillus naganoensis)普鲁兰酶的100‑926氨基酸肽段，同时将其436位点的天冬氨酸Asp突变为组氨酸His，改造得到一个新的普鲁兰酶突变体。本发明优点：该突变酶相对于突变前的酶具有优良的特性，其中酶的表达量是亲本酶的3.8倍，最适温度提高2.5℃，催化活性是亲本酶的1.36倍。该突变体基因以同源重组的方式整合到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)染色体中构建重组枯草芽孢杆菌，能稳定地发酵生产普鲁兰酶。该突变体酶能够提高淀粉和普鲁兰糖的水解效率。
普鲁兰酶突变体亲本酶制备重组枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌氨基酸肽段突变体基因催化活性方式整合普鲁兰糖天冬氨酸同源重组突变体酶芽孢杆菌表达量突变酶组氨酸染色体构建截取水解位点淀粉发酵突变应用改造生产

[发明专利]一种耐酸性高温β-淀粉酶的突变体TBA-H2及其应用-CN201410094145.2有效
发明人：梁莲华;王成华;蒙健宗;李晓明;韦航 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2014-03-13 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C12N9/26 文献下载
摘要：一种耐酸性高温β-淀粉酶的突变体TBA-H2及其应用，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，该突变体相对于突变前的酶具有酸性的最适pH值和更高的生成麦芽糖的功能。本发明所述的高温β-淀粉酶的突变体TBA-H2能够在降解淀粉质材料中应用，尤其适合于在酸性条件下降解淀粉生成麦芽糖中的应用。
一种耐酸高温淀粉酶突变体 tba h2 及其应用

[发明专利]一种耐酸性高温β-淀粉酶突变体及其应用-CN201310730539.8有效
发明人：王成华;蒙健宗;梁莲华;程婷婷;李晓明;韦航;陈发忠;杜奇石;周礼芹 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2013-12-25 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： C12N9/24 文献下载
摘要：一种耐酸性高温β-淀粉酶突变体及其应用，以热硫梭菌（Thermoanaerobacterium thermosulfurigenes）高温β-淀粉酶为亲本，采用分子酶工程技术，将催化功能域附近的小氨基酸，包括第115位半胱氨酸、312位丙氨酸、351位苏氨酸和354位半胱氨酸改造为丝氨酸，具体为含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列，所获得的变体β-淀粉酶在保持耐温特性的同时将最适pH值由亲本酶的pH6.0降低为pH4.0，活力提高1.4倍，该耐酸性高温变体β-淀粉酶比野生型更有利于淀粉工业的工业化生产。
一种耐酸高温淀粉酶突变体及其应用

[发明专利]一种高效表达重组普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌及其获得方法-CN201310174694.6有效
发明人：李晓明;黄日波;韦玉琴;李丛;蒙健宗;梁莲华;陆迪;廖东庆;韦航 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2013-05-13 - 公布日： 2013-07-31 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达重组普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌及其获得方法。具体是将普鲁兰酶表达元件以同源重组的方式整合到枯草芽孢杆菌染色体中构建整合型重组枯草芽孢杆菌，以此重组枯草芽孢杆菌为菌种，在营养培养基中发酵生产普鲁兰酶。本发明的优点是：本发明利用食品安全的表达系统表达生产普鲁兰酶，整合型表达的菌株所含的外源基因能够稳定传代和表达，产品达到食品要求，产品无抗菌活性。
一种高效表达重组普鲁兰酶枯草芽孢杆菌及其获得方法

[发明专利]一种纯生啤酒膜清洗再生酶制剂及清洗方法-CN201110393743.6有效
发明人：蒙健宗;郑翔鹏;李晓明;梁树华;马少敏;张云光;韦函忠 -专利权人：广西大学;南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2011-12-01 - 公布日： 2012-06-13 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种纯生啤酒膜清洗再生酶制剂及清洗方法。本发明依据纯生啤酒膜堵物质成分设计的膜清洗再生酶制剂包括以下组分：清洗再生酶I：戊聚糖酶(10000U/g)40-80％，β-葡聚糖酶(20000U/g)10-50％，甘露聚糖酶(10000U/g)2-20％；清洗再生酶II：脯氨酸内切蛋白酶(5U/g)40-80％，中性蛋白酶(100000U/g)20-60％。优化的纯生啤酒膜清洗再生方法为：常规水洗和碱法清洗--酶法保温循环清洗--酶法浸渍清洗--水洗--碱法清洗-完整性测试。本发明的膜清洗再生酶有效解决了纯生啤酒膜堵物质引起的膜通量下降问题，提高膜的再生能力和纯生啤酒滤酒能力35％以上。
一种生啤酒清洗再生酶制剂方法

[发明专利]一种在枯草芽孢杆菌中以整合型的方式重组表达β-淀粉酶的方法-CN201010563646.2有效
发明人：李晓明;蒙健宗;周礼芹;张云光;梁莲华;廖东庆 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2010-11-29 - 公布日： 2011-07-20 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种在枯草芽孢杆菌中以整合型的方式重组表达β-淀粉酶的方法。具体是将β-淀粉酶表达元件整合到枯草芽孢杆菌染色体中构建整合型重组枯草芽孢杆菌，以此重组枯草芽孢杆菌为菌种，在营养培养基中发酵生产β-淀粉酶。本发明的优点是：本发明利用食品安全的表达系统表达生产β-淀粉酶，整合型表达的菌株所含的外源基因能够稳定传代和表达，产品达到食品要求，产品无抗菌活性。
一种枯草芽孢杆菌整合方式重组表达淀粉酶方法

[发明专利]将两个或两个以上外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体同一个整合位点的方法-CN201010563647.7有效
发明人：廖东庆;李晓明;黄日波;张云光;韦玉琴;梁莲华;李丛 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2010-11-29 - 公布日： 2011-07-20 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了将两个或两个以上外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体同一整合位点的方法。首先将外源基因表达单元克隆到含抗性基因筛选标记A的整合质粒，利用整合质粒将外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体获得重组菌1，然后利用替换抗性基因筛选标记的质粒将重组菌1中的抗性基因筛选标记A替换为另一抗性基因筛选标记B，得到重组菌2。整合质粒再转化重组菌2，通过抗性基因筛选标记A和B进行筛选得到包含两个外源基因表达单元的重组菌。重复替换抗性基因和整合，可以获得两个以上相同或不同的外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体的重组菌。这种方法对构建整合型枯草芽孢杆菌表达菌株具有重要的应用前景。
两个以上基因表达单元整合枯草芽孢杆菌染色体同一个方法

[发明专利]一种以整合型重组枯草芽孢杆菌为菌种生产α-乙酰乳酸脱羧酶的方法-CN201010271749.1有效
发明人：李晓明;廖东庆;岳田芳;王青艳;黄日波;蒙健宗;林海鹏;李丛;王子龙;马少敏;陈发忠;张云光;梁莲华;罗兆飞 -专利权人： 南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2010-09-03 - 公布日： 2011-01-19 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种以整合型重组枯草芽孢杆菌为菌种生产α-乙酰乳酸脱羧酶的方法。具体是将α-乙酰乳酸脱羧酶表达元件整合到枯草芽孢杆菌染色体中构建整合型重组枯草芽孢杆菌，以此重组枯草芽孢杆菌为菌种，在营养培养基中发酵生产α-乙酰乳酸脱羧酶。本发明的优点是：本发明利用食品安全的表达系统生产α-乙酰乳酸脱羧酶，整合型表达的菌株所含的外源基因能够稳定传代和表达，产品达到食品要求，产品无抗菌活性。
一种整合重组枯草芽孢杆菌菌种生产乙酰乳酸脱羧酶方法

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