本发明公开了一种特异性接头分子标签及其在预测可变剪切中的应用,包含:核心序列;随机序列(N)n,N为随机序列,共n个;和反向互补序列;其中核心序列如SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2所示,反向互补序列如SEQ ID NO.3所示。本发明在转座酶包埋复合物上增加特异性接头分子标签,使cDNA片段在不同酶切位点上连接的接头分子标签序列不同,在测序数据拼接时,带相同分子标签的cDNA片段连接在一起,得出转录本序列,检测可变剪接事件。本发明保证了拼接的高度准确性,还原了转录本的真实情况,在拼接的时候即使出现外显子跳跃情况,也能准确进行拼接,从而获得更多的遗传信息,增加可变剪切预测的数量。
一种cDNA的特异性分子标签及其应用,该特异性分子标签包括:如SEQ ID NO.1所示的通用引物序列;如SEQ ID NO.2所示的转座酶接头序列P7;随机序列:(N)n,N为随机序列,共n个;和共有30个T碱的poly(T)序列,具体核苷酸序列如SEQ ID NO.3所。将特异性分子标签应用于cDNA建库中,在RNA逆转录成全长cDNA过程中,该特异性分子标签加在每一个cDNA的5`端,使每一个基因都是独一无二的,后续的信息分析可以根据该特异分子标签的序列量化样品中每一个基因。
本发明提供一种Taq DNA聚合酶突变体及其应用,本发明所述的Taq DNA聚合酶突变体,其是如SEQ ID NO.1所示的Taq DNA聚合酶的氨基酸序列中插入、取代、或缺失1个或多个氨基酸,或者在SEQ ID NO.1序列的一个或两个末端添加或删除1个或多个氨基酸,且与SEQ ID NO.1所示的Taq DNA聚合酶相比,其扩增灵敏度和产量均增强的氨基酸序列。本发明所述的Taq DNA聚合酶突变体相对于原Taq DNA聚合酶,灵敏度和产量均有所提高,还可以用于低质量样本的多重扩增。