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[发明专利]PaDP蛋白和其突变体在普瑞巴林手性中间体酶法合成中的应用-CN202310269495.7在审
发明人： 刘菲霞;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2023-03-16 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N9/78 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域。本发明提供了一种PaDP蛋白，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。本发明提供的经过氨基酸位点的组合突变获得了一个活力和热稳定性提高的突变体，同时经过大肠杆菌杂酸途径的敲除进一步提高了蛋白的表达量。经过高密度发酵后的全细胞催化可以实现24h内酶解150g/L底物3‑异丁基戊二酰亚胺，且保持较高的光学纯度，可以很好的满足现在的工业化生产。
padp 蛋白突变体巴林手性中间体合成中的应用

[发明专利]酿酒酵母工程菌株及其在合成苄基硫苷中的应用-CN202211415948.4在审
发明人：张彬;刘菲霞;何秀萍;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2022-11-12 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明属于酿酒酵母工程技术领域。本发明提供了一种酿酒酵母工程菌株YS58‑BG，将打靶片段连同筛选标记ura3打靶到酿酒酵母YS58的delta位点并反筛敲除ura3基因后获得；所述打靶片段是由CYP79A2、CYP83B1、ATR2、GSTF9、GGP1、SUR1、UGT74B1和SOT18基因片段依次连接。本发明提供的菌株能发酵产苄基硫苷。
酿酒酵母工程菌株及其合成苄基中的应用

[发明专利]一种生产高纯度3-HPA的罗伊氏乳杆菌工程菌株及其制备方法与应用-CN202011405474.6在审
发明人： 刘菲霞;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2020-12-03 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产高纯度3‑HPA的罗伊氏乳杆菌工程菌株及其制备方法与应用。所述制备方法包括如下步骤：敲除野生型罗伊氏乳杆菌中的金属离子依赖性脱氢酶pduQ基因和/或金属离子依赖性脱氢酶ADH7基因。本发明最终获得敲除pduQ基因和ADH7基因的LR2(△pduQADH7)双敲菌株和敲除pduQ基因的LR1(△pduQ)单敲除株。通过全细胞转化生产实验表明：LR2(△pduQADH7)双敲菌株的3‑HPA产量(217.18±5.40mM)明显高于LR1(△pduQ)单敲菌株(193.13±1.08mM)以及野生型菌株(143.13±1.35mM)，而副产物1,3‑PDO产量明显下降。
一种生产纯度 hpa 罗伊杆菌工程菌株及其制备方法应用

[发明专利]一种(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸合成蛋白及其突变体与应用-CN202010946227.0在审
发明人： 刘菲霞;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2020-09-10 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C12N9/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸合成蛋白及其突变体与应用。本发明公开的(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸合成蛋白，为SEQ ID No.1的第37‑508位氨基酸的蛋白质，该蛋白可以催化3‑异丁基戊二酰亚胺生成单一手性(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸的酰胺水解酶，同时可以利用点突变技术获得具有可以催化合成高纯度R型产物的突变体，通过生物法实现环亚胺到R‑单酰胺的专一转化，从而减少化学反应步骤，最后可利用本发明制备的R‑单酰胺进一步最终获得高光学纯度的S‑普瑞巴林。本发明对于高光学纯度的S‑普瑞巴林生产具有重要意义。
一种氨甲酰甲基己酸合成蛋白及其突变体应用

[发明专利]生产萝卜硫苷的重组菌的构建与应用-CN201910608769.4在审
发明人：杨寒;刘菲霞;李寅;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2019-07-08 - 公布日： 2021-01-08 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了生产萝卜硫苷的重组菌的构建与应用。本发明的生产萝卜硫苷的构建方法，包括增加受体菌中如下蛋白质的含量或活性获得目的重组菌：BCAT3蛋白质、GSL‑ELONG蛋白质、LSU1蛋白质、SSU3蛋白质、IPMDH1蛋白质、CYP79F1蛋白质、CYP83A1蛋白质、ATR2蛋白质、EGT2蛋白质、UGT74B1蛋白质、ST5c蛋白质和FMOGS‑OX1蛋白质。实验证明，利用本发明的重组菌的构建方法可成功获得能够生产萝卜硫苷的重组菌，得到的重组菌可用于生产萝卜硫苷，具有广泛的应用前景。
生产萝卜重组构建应用

[发明专利]一种用微生物酶法合成苄基异硫氰酸酯的方法-CN201610079652.8有效
发明人： 刘菲霞;杨寒;王丽敏;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2016-02-04 - 公布日： 2019-12-31 - 主分类号： C12P13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种用微生物酶法合成苄基异硫氰酸酯的方法。本发明所提供的方法包括如下步骤：将7种反应底物和6种蛋白配制成反应体系，反应后获得所述苄基异硫氰酸酯；所述7种反应底物分别为苯丙氨酸、半胱氨酸、腺嘌呤核苷三磷酸、还原型辅酶Ⅱ、尿苷二磷酸葡萄糖、3′‑磷酸腺苷‑5′‑磷酰硫酸和磷酸吡哆醛；所述6种蛋白分别为序列表中序列1、3、5、7、9和11所示的MA2R2蛋白、MB1R2蛋白、METC蛋白、UGT74B1蛋白、SOT18蛋白和BMYR蛋白。该方法是在现有的植物体内苄基异硫氰酸酯合成途径的基础上，进行改造后获得的。实验证明，该方法可以体外合成出苄基异硫氰酸酯。本发明为其他途径复杂的异硫氰酸酯在微生物中的合成奠定基础。
一种微生物合成苄基氰酸方法

[发明专利]一种利用固定化细菌生产罗伊氏素的方法-CN201510032747.X有效
发明人： 刘菲霞;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2015-01-22 - 公布日： 2017-12-15 - 主分类号： C12P7/42 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用固定化细菌生产罗伊氏素的方法。本发明所提供的生产罗伊氏素的方法，包括如下步骤(1)采用磁性纳米颗粒和卡拉胶的混合物对罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)进行固定，得到固定有所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)的胶粒；(2)配制含有步骤(1)所得胶粒的反应体系，将所述反应体系于30℃静置反应2h，从反应液中获得罗伊氏素；在所述反应体系中，含有浓度为200‑250mmol/L的甘油。该方法与传统方法相比，提高了甘油的转化率，大幅提升了罗伊氏素的产量。另外，本发明所采利用菌株为生物安全菌株，可直接用于食品领域；并且利用该方法制备的细胞催化剂具有磁性，可以很方便的从水相中分离菌体，便于罗伊氏素的纯化，固定化的细胞催化剂可以重复利用，降低了成本。
一种利用固定细菌生产罗伊方法

[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其在生产γ‑聚谷氨酸中的应用-CN201710158450.7在审
发明人：王丽敏;马力群;刘菲霞;于波 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2017-03-16 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种枯草芽孢杆菌及其在生产γ‑聚谷氨酸中的应用。本发明提供一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)KH2，其保藏编号为CGMCC NO.12426。本发明还保护枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)KH2在生产γ‑聚谷氨酸中的应用。本发明利用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)KH2生产γ‑PGA，以工业葡萄糖为底物，以0.96‑1.20克/升/小时的转化率高效发酵生产γ‑PGA，γ‑PGA浓度最高可达46.0克/升，其中γ‑D‑PGA所占比例为84％‑86％，生产能力高，培养基成分简单，同时也可以控制γ‑PGA的生产成本。
一种枯草芽孢杆菌及其生产谷氨酸中的应用

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