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[发明专利]冻存脐带血单个核细胞的分离方法及应用-CN202310735552.6在审
发明人：张宇;李光昭;刘容志;赵云艳 -专利权人：协和干细胞基因工程有限公司
申请日： 2023-06-20 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及冻存脐带血单个核细胞的分离方法及应用。本发明提供的分离方法通过复苏稀释液的优化和分离过程的优化，有效去除了冻存脐血中的红细胞和血小板和粒细胞，实现冻存脐血分离所得单个核细胞的纯度和活率，与现有手工分离平均水平相比，总细胞得率提高了45％，CD34+细胞回收率是现有水平的2.2倍，更利于后续的细胞培养和分选研究，减少了因细胞凝块和血小板残留导致的细胞培养失败的风险。本发明提供的分离方法均采用符合药典要求的原材料或药用辅料，且单个核细胞分离效果稳定，从而可以更有效地利用冻存脐血资源，使所得单个核细胞更能满足后续研究需求。
脐带血单个细胞分离方法应用

[发明专利]一种人iPS细胞基因编辑和筛选方法-CN202011200016.9在审
发明人：杜宏伟;杜为;刘容志;崔丽娟;徐迎;张金美;张宇;杨文玲 -专利权人：协和干细胞基因工程有限公司
申请日： 2020-10-30 - 公布日： 2021-01-26 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种人iPS细胞基因编辑和筛选方法，将编辑质粒通过电转方法导入iPS细胞；通过抗性筛选富集产生基因编辑的细胞；低密度传代，挑取单克隆细胞集落进行扩大培养和鉴定。由EF1α启动子启动能在人iPS细胞内同时启动Cas9和筛选抗性蛋白表达的游离型质粒，此质粒进入人iPS细胞中后，可在细胞中短暂而稳定的同时表达Cas9蛋白和抗性蛋白，在质粒转录表达最旺盛的时间段，在培养环境中添加筛选物，获得外源质粒并表达抗性蛋白的iPS细胞得以存活，同时表达的Cas9蛋白在sgRNA的引导下在基因组目的序列位置进行双链切割进行基因编辑，而未获得外源质粒或质粒未表达的细胞则因不含有抗性而死亡。避免流式细胞分选仪的使用或外源基因插入到细胞基因组中。
一种 ips 细胞基因编辑筛选方法

[发明专利]用诱导多能干细胞或胚胎干细胞快速高效制备拟胚体的方法-CN202010048972.3在审
发明人：杜宏伟;崔丽娟;王征宇;杜为;徐迎;张金美;刘容志 -专利权人：协和干细胞基因工程有限公司
申请日： 2020-01-16 - 公布日： 2020-05-12 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种用诱导多能干细胞或胚胎干细胞快速高效制备拟胚体的方法，将诱导多能干细胞iPS/胚胎干细胞ES消化为小的细胞团块或单细胞；以适当浓度接种于培养基；在水平摇动条件下培养制备成聚合球体；分离聚合细胞球体继续培养形成拟胚体。本发明在适当的细胞浓度和适当的水平转动摇动条件下形成细胞聚合球体，再对细胞球体进行分化培养形成拟胚体，本方法无需额外耗材，操作简单，制备通量高，拟胚体形成率高，结构稳定。
诱导多能干细胞胚胎快速高效制备拟胚体方法