本发明公开了一种抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体及其应用。一种抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体,包括重链可变区和轻链可变区;所述重链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.3~SEQ ID No.5所示;所述轻链可变区的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.6~SEQ ID No.8所示。本发明提供一种对黄曲霉毒素B1具有较高亲和力和检测灵敏度的单克隆抗体,为ELISA、胶体金试纸条及荧光免疫试纸条的研发推广奠定基础。本发明的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高等特点,可作为酶联免疫检测和胶体金免疫检测的原料。