本申请公开一种高产T2毒素的野生菌株、突变株及其用途,野生菌株的分类命名为拟枝孢镰刀菌Fusarium sporotrichioides,菌株编号为Fsp1,保藏号为CCTCC M 2023693;突变株为所述野生菌株的gp2基因缺失突变体。本申请基于筛选到的具有T‑2毒素完整合成基因簇的拟枝孢镰刀菌Fsp1为受体菌株,利用基因靶向改造构建负调控元件gp2的敲除框,构建了高产T‑2毒素的gp2缺失突变体菌株(△Fspgp2)。在产毒诱导大米培养基中,△Fspgp2的T‑2毒素产量较野生型菌株Fsp1提高14.6倍,产量为422mg/kg,可用于T‑2毒素的宏量制备纯化。
本发明公开一组镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物,包括如SEQ ID NO.1所示的共用上游引物F,如SEQ ID NO.2所示的3‑乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R1,如SEQ ID NO.3所示的15‑乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R2,如SEQ ID NO.4所示的雪腐镰刀菌烯醇下游引物R3,该组引物可应用于PCR直接检测3‑乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15‑乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇以及雪腐镰刀菌烯醇,成本低,操作简单,耗时短,检测结果准确,易于大规模推广应用。
本发明提供一种基于实时荧光定量PCR 检测小麦根际土壤中丛枝菌根真菌数量的方法,首先提取小麦根际土壤样本总DNA作为PCR扩增的模板,然后以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2为引物扩增获得129bp的特异性片段,经连接、转化后,再以qPCR扩增;本发明方法法不仅鉴定了丛枝菌根,并且可以准确的对其进行绝对定量,得到在转基因小麦各个生育期丛枝菌根真菌的拷贝数,在小麦生长发育阶段,丛枝菌根拷贝数的变化总体呈现逐渐增加的趋势,本发明建立了快速、简便而精确的鉴定方法,为后续试验提供了理论和试验依据,对进一步评价转基因作物的安全性具有重要意义,与现有方法相比,本发明方法敏感性高,特异性强,重复性好,操作方便,结果直观。