本发明提供了一种转氨酶及使用其进行催化制备的方法，本申请中的转氨酶具有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。此外，使用本申请中的转氨酶还能催化一种化合物C的制备方法，其包括如下步骤：在pH＝7.5～9.0的缓冲液中，在转氨酶、氨基供体和磷酸吡多醛存在下，将化合物B进行如下所示的转氨化反应得化合物C即可；所述转氨酶具有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；R1、R2、R3、R4和R5分别独立地为H、卤素、C1‑C3烷基、C1‑C3烷氧基或CN。以本申请中的转氨酶催化的制备方法，条件温和、选择性高、原料转化率高、收率高且产物手性纯度高。
本发明公开了一种使用羰基还原酶及其突变体对羰基的不对称还原方法。具体地，本发明公开了一种使用羰基还原酶及其突变体对羰基的不对称还原方法，其包括如下步骤：羰基还原酶或其突变体和辅酶的存在下，将化合物II在有机溶剂中进行不对称还原反应得到化合物I即可；所述羰基还原酶为如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其突变体。本发明的积极进步效果在于：以本申请中的羰基还原酶催化的羰基还原反应，选择性低、收率低、纯度低、利于工业化生产。
本发明公开了一种使用氨基转移酶突变体制备手性内酰胺类化合物的方法。具体地，所述方法包括如下步骤：在氨基转移酶突变体的存在下，将化合物I和氨基供体在反应溶剂中进行胺化反应，得到化合物II即可；所述的氨基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述的突变体为在如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列上具有一个或多个位点的氨基酸残基的差异。本发明基于上述氨基转移酶突变体，开发了合成β‑(S)手性内酰胺类化合物的反应工艺，能在比较高的温度下反应(47℃)，对映异构体过量值(e.e.)大于80％，收率大于40％。
本发明公开了一种来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的氨基转移酶突变体及其应用。具体地，本发明公开了一种反式氨基环己基类化合物的制备方法，其包括以下步骤：在氨基转移酶的存在下，将如式I所示的环己基酮类化合物和氨基供体进行如下所示的胺化反应，即得如式II所示的反式氨基环己基类化合物；其中，R为‑COOR1或‑CN；R1为氢或C1～C6烷基；所述的氨基转移酶为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的来源于巨大芽孢杆菌的氨基转移酶的突变体。本发明利用氨基转移酶突变体催化环己酮类化合物合成为反式氨基环己基类化合物，且收率大于80％、纯度大于98.0％，反式氨基环己基类化合物在产物中的占比大于90％，具有较高的工业应用价值。
本发明公开了一种使用烯还原酶及其突变体对潜手性碳碳双键的不对称还原方法。具体地，本发明公开了一种烯还原酶或其突变体对潜手性碳碳双键的不对称还原方法，其包括如下步骤：烯还原酶或其突变体和辅酶的存在下，将如化合物II在有机溶剂中进行催化还原反应得化合物I即可；所述烯还原酶为如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或其突变体。本发明的积极进步效果在于：以本申请中的烯还原酶催化的碳碳双键还原反应，条件温和、选择性高、成本低、原料转化率高、收率高且产物手性纯度高。
