本发明涉及一种利用昆虫细胞生产人血清白蛋白的方法、核苷酸序列及表达载体,属于生物技术领人血清白蛋白的生产领域。本发明人血清白蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明根据昆虫细胞密码子偏好性,对人血清白蛋白基因进行密码子优化,搭配核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的信号肽序列,能够实现人血清白蛋白在Sf9细胞中的表达。本发明进一步公开利用昆虫细胞生产人血清白蛋白的方法,在生产过程中添加小分子添加物,可有效的提高人血清白蛋白在Sf9细胞中的表达量。
本发明公开了一种重组人血白蛋白的基因、表达载体及制备方法。其中,对人血白蛋白基因进行密码子优化得到所述重组人血白蛋白基因,所述重组人血白蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.11中任一项所示。本发明获得的rHSA克服了大肠杆菌表达系统表达产物由于存在于细胞质中并形成包涵体、操作步骤繁琐、难以正确复性、且在原核生物中表达量不高(毫克级)、没有工业化价值的不足;还可避免转基因动物来源的rHSA仍存在病毒污染的风险;同时,该表达体系较转基因植物表达量高,且没有植物培养周期长、受气候影响的限制,可规模化表达。
本发明公开了适于家蚕丝腺表达的改造人血清白蛋白基因及其表达系统和应用,改造人血清白蛋白基因如SEQ ID NO.1第7‑1767位所示,其编码的氨基酸如SEQ ID NO.2所示,将改造人血清白蛋白基因与分泌型丝胶1基因启动子和分泌型丝胶1基因终止子构成表达框,并用增强子Hr3增强表达,同时连入piggyBac转座臂和荧光筛选标记基因构建表达系统,该表达系统能够在家蚕丝腺中高效表达重组人血清白蛋白,并且具有生物活性,能够用于大规模生产重组人血清白蛋白,具有良好的市场前景。