[发明专利]ErbB3蛋白在制备膀胱癌无创诊断产品中的应用在审
申请号: | 201811499065.X | 申请日: | 2018-12-08 |
公开(公告)号: | CN111289748A | 公开(公告)日: | 2020-06-16 |
发明(设计)人: | 丘少鹏;陈旭;王思豪 | 申请(专利权)人: | 惠州市中大惠亚医院 |
主分类号: | G01N33/574 | 分类号: | G01N33/574 |
代理公司: | 广州渣津专利代理事务所(特殊普通合伙) 44516 | 代理人: | 曾妮;陆思宇 |
地址: | 516081 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | erbb3 蛋白 制备 膀胱癌 诊断 产品 中的 应用 | ||
1.ErbB3蛋白在制备膀胱癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:包括以下步骤:
S1、对怀疑罹患膀胱尿路上皮癌患者进行病史采集和体格检查;
S2、对符合诊断条件的患者进行诊断前准备;
S3、对诊断时所需要的材料进行准备;
S4、对已经包被抗体的ELISA板平衡至室温后,向对应的孔加入 100µL配制好的尿液样品;
S5、向已经包被抗体的ELISA板中加入生物素标记抗ErbB3抗体;
S6、向已经包被抗体的ELISA板中加入稀释后的HRP-链霉亲和素;
S7、向已经包被抗体的ELISA板中依次加入TMB显色液和终止液,利用酶标仪450nm读数;
S8、采用sigmaplot 12.0软件计算浓度值;
S9、根据计算的ErbB3蛋白浓度值与健康人群的ErbB3蛋白浓度值进行对比,诊断患者是否患有膀胱尿路上皮癌。
2.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S1中,进行膀胱尿路上皮癌诊断的患者需要满足任何初诊疑似膀胱尿路上皮癌,且既往未行化疗、放疗或手术等抗肿瘤治疗;患者既往无罹患可能对尿蛋白产生影响的相关疾病。
3.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S2中,确认患者满足S1中所有条件后,取患者入院后第二天的晨尿,立即于4℃条件下,通过4500r/min离心机离心10分钟,取至少2ml上清液保存于-80℃冰箱,备用。
4.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S3中,诊断前所需要的材料包括:包被anti-HumanErbB3抗体的ELISA板、浓缩20×洗液、去离子水、洗板机、生物素标记抗ErbB3抗体、浓缩200×HRP-链霉亲和素、TMB显色液、终止液和450nm酶标仪;利用去离子水将浓缩洗液稀释至20倍以备用;对浓缩HRP-链霉亲和素进行离心,然后利用去离子水稀释至200倍以备用。
5.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S4中,当已经包被抗体的ELISA板平衡至室温后,向对应的孔加入100µL配制好的标准品和患者尿液样品,用封板膜封住整块板条,4℃孵育过夜。
6.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S5中,将配制好的1x洗液添加到洗板机上,用洗板机清洗板条5次,每孔加入300µLlx洗液,洗板清洗干净后,向已经包被抗体的ELISA板每孔加入100µL配制好的生物素标记抗ErbB3抗体,室温孵育1h。
7.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S6中,将配制好的1x洗液添加到洗板机上,用洗板机清洗板条5次,每孔加入300 µLlx洗液,洗板清洗干净后,向已经包被抗体的ELISA板每孔加入100µL配制好的HRP-链霉亲和素,室温孵育45min。
8.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S7中,将配制好的1x洗液添加到洗板机上,用洗板机清洗板条5次,每孔加入300 µLlx洗液,洗板清洗干净后,向已经包被抗体的ELISA板每孔加入100µLTMB显色液,室温避光孵育30min,并向已经包被抗体的ELISA板每孔加入50µL终止液,立即在酶标仪450nm读数。
9.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S8中,采用sigmaplot 12.0软件计算尿标本的ErbB3蛋白浓度值。
10.根据权利要求1所述的ErbB3蛋白在制备膀胱尿路上皮癌无创诊断产品中的应用,其特征在于:所述步骤S9中,将最终得到的患者晨尿中的ErbB3蛋白浓度的值与健康人群尿液中ErbB3蛋白浓度值进行对比和分析,对患者是否患有膀胱癌进行诊断。
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