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2020-09-11 公布专利
2020-09-08 公布专利
2020-09-04 公布专利
2020-09-01 公布专利
2020-08-28 公布专利
2020-08-25 公布专利
2020-08-21 公布专利
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2020-08-11 公布专利
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[发明专利]一种用于人类SLC25A13基因10个常见突变位点的基因分型检测试剂盒在审

1.一种用于对分布于人类7号染色体上SLC25A13基因的10个基因位点同时进行基因分型检测的复合PCR扩增系统,所述扩增系统中10个基因位点对应PCR扩增引物分别为:

位点c.955C>T(CT1),相应引物序列为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3;

位点c.1638_1660dup23(CT2),相应引物序列为SEQ ID No.4和SEQ ID No.5;

位点c.754G>A(CT3),相应引物序列为SEQ ID No.6、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8;

位点IVS16ins3kb(CT4),相应引物序列为SEQ ID No.9、SEQ ID No.10和SEQ IDNo.11;

位点IVS6+5G>A(CT5),相应引物序列为SEQ ID No.12、SEQ ID No.13和SEQ ID No.14;

位点IVS11+1G>A(CT6),相应引物序列为SEQ ID No.15、SEQ ID No.16和SEQ IDNo.17;

位点g.1592G>A(CT7),相应引物序列为SEQ ID No.18、SEQ ID No.19和SEQ ID No.20;

位点851-854del4(CT8),相应引物序列为SEQ ID No.21和SEQ ID No.22;

位点c.1399C>T(CT9),相应引物序列为SEQ ID No.23、SEQ ID No.24和SEQ ID No.25;和

位点c.1092_1095delT(CT10),相应引物序列为SEQ ID No.26和SEQ ID No.27;

其中各基因位点对应的的引物组中均有一条非特异性引物采用FAM荧光素进行标记。

2.如权利要求1所述的复合PCR扩增系统,其特征在于,10个基因位点对应的PCR扩增引物的工作浓度为50~300nmol/L。

3.如权利要求1所述的复合PCR扩增系统,其特征在于,引物由SEQ ID No.1至27所示核苷酸序列的PCR扩增引物的干粉或溶液组成。

4.一种对分布于人类7号染色体上SLC25A13基因的10个基因位点进行Citrin蛋白缺陷症分型检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含含有权利要求1所述PCR扩增系统的引物组合物容器、PCR反应母液容器和辅助液容器;其中,

所述引物组合物容器包含序列为SEQ ID No.1至SEQ ID No.27所示的引物的贮存液,贮存液中各引物的浓度为相应引物工作液浓度的10倍;

所述PCR反应母液容器内含有进行PCR反应的2倍反应浓度的PCR反应母液,PCR反应母液包含10-20ng/μL的DNA聚合酶、15-30mmol/L的镁离子、5-10nmol/L的dNTP;

所述辅助液容器内含有进行PCR反应的10倍反应浓度的辅助液,PCR反应辅助液包含0.1-0.6wt%的NaCl、30-50wt%的甘油、0.03-0.07mol/L的Tris。

5.权利要求4所述试剂盒在非诊断性进行Citrin蛋白缺陷症的基因分型检测中的用途。

6.一种如权利要求4所述检测试剂盒的使用方法,其特征在于,包括步骤:

(1)提取人基因组DNA,紫外分光定量基因组DNA浓度为1-3ng/μL;

(2)多重PCR扩增:总反应体系为20μL,反应体系组成如下:

(3)PCR反应在普通PCR仪进行,PCR反应条件如下:95℃15分钟启动后,95℃30秒、58℃45秒、72℃60秒,共28个循环,然后72℃保温60分钟,然后4℃保温;

(4)PCR产物取1μL,按常规操作在遗传分析仪上进行毛细管电泳;

(5)对电泳后的数据利用专用数据分析软件分析,得到每一个基因位点的分型图谱和数据。

7.如权利要求6所述的使用方法,其特征在于,所述DNA模板为人类基因组DNA,所述人类基因组DNA来自人血液、血斑、精液、精斑、唾液、唾液斑、羊水、毛发、肌肉组织、骨骼中的一种或多种。

8.权利要求1所述PCR扩增系统在制备同时对人类7号染色体上SLC25A13基因的10个基因位点进行Citrin蛋白缺陷症的基因分型检测的试剂盒中的用途。

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