[发明专利]一种免疫细胞培养方法及其应用在审

专利信息
申请号: 201810428733.3 申请日: 2018-05-07
公开(公告)号: CN108753724A 公开(公告)日: 2018-11-06
发明(设计)人: 徐智峰;张新 申请(专利权)人: 广州沙艾生物科技有限公司
主分类号: C12N5/0786 分类号: C12N5/0786
代理公司: 北京华识知识产权代理有限公司 11530 代理人: 赵永强
地址: 510000 广东省广州市国际*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 免疫细胞 免疫细胞培养 单个核细胞 表型分析 体外诱导 细胞活性 细胞形成 应用试验 菌落 灭活 血浆 应用 生长 分析
【权利要求书】:

1.一种免疫细胞培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1.分离单个核细胞;

S2.血浆的分离与灭活;

S3.免疫细胞的体外诱导培养;

S4.细胞活性分析及表型分析。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞培养方法,其特征在于,步骤S1还包括以下步骤:

(1)将血液置于有抗凝剂的试管中,再将血液轻轻倒入含有淋巴细胞分离液试管中,不需要将血液和淋巴细胞分离液混匀,25℃,1000rpm,离心20min,上下加速度均为0;

(2)离心后,血液被分为四层,上层的血浆、血浆和分离液之间的单核细胞处于第二层、第三层的淋巴细胞分离液及第四层的红细胞;用吸管将第2层单核细胞以及3层分离液收集至灭菌过的离心管中,加入等量的PBS,然后25℃,2000rpm,离心10min,上下加速度均为0;

(3)重复上述步骤2次,最后进行重悬调整,计数备用。

3.根据权利要求1所述的免疫细胞培养方法,其特征在于,步骤S2还包括以下步骤:

(1)用无菌吸管采集上层的血浆,倒入灭菌过的离心管中,不要吸取到第2层的单核细胞;

(2)然后置于62-65℃水浴锅中热灭活10min,25℃,1000rpm,离心10min,吸取上清液于灭菌的离心管中,在冰箱中保存备用。

4.根据权利要求1所述的免疫细胞培养方法,其特征在于,步骤S3还包括以下步骤:

(1)体外培养体系:5ml血浆,800ml ALys505NK-AC培养基,IL-21000u/ml;

(2)第一天:培养瓶抗体包被,在培养瓶内加入10毫升PBS和1毫升Erb B2抗体(2.4mg/ml),一起孵育约1小时,再用10毫升PBS沿培养瓶侧壁轻轻洗涤2次,最后把培养基加入已包被Erb B2抗体的培养瓶中。在75cm2培养瓶中,加入4ml PBS(-)和1m LErb B2储备液,细胞悬液混合均匀后分别加入培养瓶中,接种的细胞浓度约1×107cell/ml,倒置显微镜下观察后,置于37摄氏度,湿度为50%-70%,5%的CO2培养箱中培养。

(3)第三天:加入相应小牛血清,加入后终浓度为20ng/ml;

(4)第七天:加入500ml ALys505NK-AC培养基,IL-51000u/ml;新鲜血浆5ml;

(5)第十天:加入300ml ALys505NK-AC培养基,IL-51000u/ml;

(6)第十二天:收获细胞。

5.权利要求1所述的免疫细胞培养方法在制备免疫细胞产品中的应用。

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