[发明专利]基于CDC27基因用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医学分子诊断领域，具体涉及基于与结直肠癌转移及预后相关的基因CDC27而开发得到的一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒。

背景技术

大肠癌(colorectalcancer，CRC)是人类主要恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率分别位于第三位和第四位。每年有120万新确诊的病例，并且有超过60万名患者死于结直肠癌。

近年来由于生活水平的提高和膳食结构的改变，结直肠癌正逐渐成为我国常见的恶性肿瘤，尤其是在我国大中城市，结直肠癌的发病率上升趋势更加明显，已成为我国肿瘤患者死亡的重要原因。随着外科手术治疗的进步及新兴化疗药物的问世，结直肠癌病人的近期疗效得到了显著提高，但其5年总存活率始终在50-60％。

大量研究表明，传统的遗传学改变和表观遗传学改变共同促进了结直肠癌的发生、发展。阐明大肠癌的发生、发展及转移的重要驱动分子事件，将有助于其早期诊断、预后预测及开发新的治疗手段。

CDC27是泛素化连接酶(anaphase-promotingcomplex,APC)的核心组成部分。已有研究表明，CDC27在结直肠癌中具有较高的突变率。另外，在前列腺癌、骨肉瘤、肾上腺皮质肿瘤以及生殖细胞肿瘤的测序研究中，CDC27也同样被发现存在着较高的突变率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒，该试剂盒可以特异性检测CDC27基因的表达有无上调，从而作为结直肠癌诊断和预后判断的依据。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种用于结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒，包括试剂A和/或试剂B：

试剂A是用于检测CDC27基因表达水平的引物对，也即用于在实时定量PCR检测CDC27mRNA表达水平的引物对，所述引物对为以下任意一对：

引物1：其序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示；

引物2：其序列如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示；

引物3：其序列如SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示；

引物4：其序列如SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示；

引物5：其序列如SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示；

引物6：其序列如SEQIDNO:13和SEQIDNO:14所示；

引物7：其序列如SEQIDNO:15和SEQIDNO:16所示；

引物8：其序列如SEQIDNO:17和SEQIDNO:18所示；

引物9：其序列如SEQIDNO:19和SEQIDNO:20所示；

引物10：其序列如SEQIDNO:21和SEQIDNO:22所示；

试剂B是用于检测CDC27蛋白含量的试剂，优选抗CDC27蛋白的抗体。

实验证明，在结直肠癌组织和细胞中，CDC27mRNA和蛋白水平显著高于正常组织，因此通过对CDC27mRNA和蛋白表达水平的检测就可以诊断结直肠癌有无发生。此外，预后分析证明CDC27高表达者预后较差。本发明据此针对CDC27设计了特异性的引物和试剂，用作结直肠癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

本发明首次报导了CDC27在结直肠癌组织和细胞株中高表达，并证明其促进结直肠癌细胞的迁移，为结直肠癌转移的辅助诊断提供了新的有力工具，具有重要的意义和极大的应用价值。

附图说明

图1是CDC27在21对结直肠癌病人组织中mRNA相对表达水平比较。

图2是western检测CDC27在结直肠癌细胞株中蛋白表达水平。

图3是免疫组织化学染色检测CDC27在结直肠癌癌旁及肿瘤组织中蛋白染色强度。

图4是CDC27蛋白在结直肠癌病人癌旁和肿瘤组织中相对表达量的比较。

图5是Kaplan-Meier生存分析证实在晚期结直肠癌病人中CDC27高表达者预后较差。

图6是THC8307细胞过表达CDC27基因后细胞的迁移图。

图7是DLD1细胞干扰CDC27基因的表达后细胞的迁移图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。