[发明专利]融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是步及融合蛋白MBP-Eppin、蛋白Eppin及其制备方法。

背景技术

当今人口爆炸和非计划妊娠是世界范围普遍现象，人口问题已成为影响人类生存、经济及环境可持续发展的重要因素，因此避孕节育成为全球研究热点。现行的避孕手段如宫内节育器、药物避孕主要针对女性，而男性的避孕手段基本局限于传统的阴茎套避孕，但都有其局限性，因此迫切需要开发一种更方便、安全、高效、价廉的避孕方法(O’Rand MG,Widgren EE,Wang Z,et al.Eppin:an effective target for male contraception[J].Mol Cell Endocrinol,2006,250(1-2):157-162.)。

研究发现人类附睾蛋白酶抑制剂－－Eppin，是男性免疫避孕的一个重要靶点，于2001年首次被发现（Richardson RT,Sivashanmugam P,Hall SH,et al.Cloning and sequencing of human Eppin:a novel family of protease inhibitors expressed in the epididymis and testis[J].Gene,2001,270(1-2):93-102.），编码Eppin的基因位于人类第20号染色体，翻译产物为一分泌型蛋白，共133个氨基酸，其第1-21个残基为信号肽。成熟蛋白含14个半胱氨酸，形成7对二硫键，经预测其结构含Kunitze和Wap型4个二硫键所构成的结构基序，该基因在睾丸及附睾中优势表达(Richardson RT,Sivashanmugam P,Hall SH,et al.Cloning and sequencing of human Eppin:a novel family of protease inhibitors expressed in the epididymis and testis[J].Gene,2001,270(1-2):93-102.Adam CLUSS,Hans LILJA and Ake LUNDWALL,et al.A locus on human chromosome20contains several genes expressing protease inhibitor domains with homology to whey acidic protein[j].Biochemcal Society,2002,368:233-242.Perumal Sivashanmugam,Susan H,Hall,Katherine G,et al.Characterization of mouse Eppin and a gene cluster of similar protease inhibitors on mouse chromosome2[J].Gene,2003,312:125-134.)。O’Rond等人的动物实验用重组Eppin免疫雄性狐猿，9只狐猿中的7只（78%）精子活动力下降且血液中出现较高滴度抗Eppin抗体，从而导致不孕；当免疫停止，7只狐猿中的5只（71%）恢复生育能力（O’Rand MG,Widgren EE,Sivashanmugam P,et al.Reverible immunocontraception in male monkeys immunized with eppin[J].Science,2004,306(5699):1189-1190.）。王增军等人研究表明正常射精后精子表面及精浆中的Eppin与精囊的精子凝固蛋白Semenogelin(Sg)结合，从而不仅维持精液微环境，免受女性阴道环境的损伤，还调节前列腺分泌的丝氨酸蛋白激酶前列腺特异性抗原（PSA）水解其生理底物Sg(Wang Z,Zhang W,Feng N,et al.Molecular mechanism of epidymal protesase inhibitor modulating the liquefaction of human semen[J].Asian J Androl,2008,10(5):770-775.)，保证精子液化后获得足够动能，而Eppin抗体干扰了Eppin与Sg的结合，从而导致免疫性不育（Wang Z,Widgren EE,Sivashanmugam P,et al.Association of eppin with semenogenlin on human spermatozoa[J].Biology of reproduction,2005,72(5):1064-1070.王增军，附睾蛋白酶抑制剂Eppin的研究进展.中华男科学杂志[J]，2007,13（2):168-170.）。